PRACTICA XXV (12/1/15)

RECUENTO DE LEUCOCITOS (WBC)

INTRODUCCIÓN

Consiste en la determinación del número de leucocitos presentes en un volumen determinado de sangre (1 mm3)
La muestra sería la misma que en RBC


MATERIAL

• El mismo que hemos utilizado para los glóbulos blancos, pero la pipeta diluidora de Thoma ha de ser para glóbulos blancos

Imagen realizada en el laboratorio


REACTIVOS

• Líquido de dilución denominado Turck (2ml de ácido acético glacial, 1ml de solución acuosa de violeta de genciana al 1%, 100 ml de agua destilada)

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• La misma que en el recuento de hematíes, pero se cuentan los leucocitos presentes en los 4 cuadrados grandes dl retículo que cada uno se divide en 16 cuadrados medianos

OBSERVACIÓN

Habría que dividir por 4 la cifra obtenida en el recuento, para calcular el número de leucocitos que hay en un cuadrado grande
Se emplea la siguiente fórmula:
WBC= L/4 x 10 x D (WBC: recuento de leucocitos; L: leucocitos contados en 4 cuadrados grandes; D: factor de dilución 10 ó 20)
La disminución del WBC se produce en las leucopenias, su aumento en las leucocitosis
Se considera normal un WBC comprendido entre 5000 y 11000 leucocitos/mm3 de sangre

Imagen realizada en el laboratorio


HOJA DE TRABAJO

A) ¿Cuál es el líquido de dilución utilizado en el WBC?
Turck

B) ¿Para qué sirve el violeta de genciana que contiene el líquido de dilución?
Para que los leucocitos puedan observarse mejor

C) ¿Con qué objetivo se pued contar los leucocitos?
10x

RESULTADOS OBTENIDOS

Leucocitos contados en 4 cuadrados grandes periféricos:

1cuadrado= 52
2cuadrado= 44
3cuadrado= 39
4cuadrado= 44

Factor de dilución: 10

WBC:

179/4x10=447,5 x 10= 4475 mm3 leucocitos


VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS

El WBC obtenido es:
Bajo

PRACTICA XXIV (9/1/15)

 

RECUENTO DE PLAQUETAS EN FROTIS SANGUÍNEO

INTRODUCCIÓN

Consiste en la determinación del número de trombocitos presentes en un volumen determinado de sangre (1mm3)
Se puede realizar contando los trombocitos presentes en varios campos de una extensión sanguínea observada microscópicamente o llevando a cabo un recuento de plaquetas más exacto, mediante el empleo de una cámara de recuento o con contadores electrónicos de células
Permite el estudio de la morfología de los trombocitos
La muestra es una extensión de sangre problema coloreada con el método de tinción tradicional que utilizaremos el panóptico rápido


MATERIAL

• Microscopio
• Papel y boli

REACTIVOS

• Líquido de inmersión

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Observar el frotis
• Elegir una zona de la preparación sanguínea, contar el número de plaquetas en 10 campos microscópicos
• Calcular la cifra media del número de plaquetas

OBSERVACIÓN

Se aplica la siguiente fórmula: PLT/mm3 = PLT/C x 20.000 (PLT/mm3: número de plaquetas por mm3 de sangre. PLT/C: media del número de plaquetas contadas en varios campos microscópicos
Cuando se observa en condiciones normales debe haber 1 plaqueta por cada 10-20 hematíes, esto equivale a la presencia en una zona del frotis donde los eritrocitos no están superpuestos de 5 a 25 trombocitos por campo
Cuando el número de plaquetas por mm3 de sangre es inferior a 130.000 se dice que hay una trombocitopenia o trombopenia o plaquetopenia y cuando es superior a 400.000 se dice que es una trombocitosis

https://www.google.es/search?q=observacion+microscopica+concentrado+leucocitos&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=i
sch&sa=X&ei=0Vu9VProM8G-Uqj6gPAO&ved=0CAYQ_AUoAQ#tbm=isch&q=plaquetas+microscopio&imgdii=_&imgrc=a-iqk
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Imagen realizada en el laboratorio

HOJA DE TRABAJO

A) En condiciones normales, ¿cuántas plaquetas por campo microscópico hay en una zona de un frotis sanguíneo donde los eritrocitos no están superpuestos?
1 plaqueta por cada 10-20 hematíes

RESULTADOS OBTENIDOS

Número de plaquetas contandas en 10 campos microscópicos:

Campo 1= 5
Campo 2= 5
Campo 3= 7
Campo 4= 4
Campo 5= 10
Campo 6= 14
Campo 7= 10
Campo 8= 19
Campo 9= 11
Campo 10=12

Hay 97 plaquetas

Media del número de plaquetas contadas en 10 campos microscópicos (PLT/C):
97/10= 9,7

Número de plaquetas por mm3 de sangre (PLT/mm3):
194.000 plaquetas por mm3

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS

El PLT/mm3 obtenido implica que el sujeto tiene:

Un número de plaquetas normal

PRACTICA XXIII (8/1/15)

 

DETERMINACIÓN DEL ÍNDICE DE LOBULARIDAD (IL)

INTRODUCCIÓN

Con extensión de sangre muy fina


MATERIAL

• Microscopio
• Boli y papel

REACTIVOS

• Líquido de inmersión

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Enfocar y observar los neutrófilos y contar sus lobulaciones, se considera que hay un lóbulo cuando una parte del núcleo está unida al resto solamente por un fino puente de cromatina
• Clasificar los neutrófilos ssegún Arneth, al tiempo que se cuentan los lóbulos de cada neutrófilo observado
• Terminar cuando mínimo se hayan contado 100 neutrófilos
• Se realiza mediante la siguiente fórmula: IL= NL/NN (IL: Índice de lobularidad; NL: Número de lóbulos contados; NN: Número de neutrófilos observados)

OBSERVACIÓN

• La desviación a la izquierda puede ser neutrofilia o neutropenia, típico de infecciones agudas como apendicitis (neutrofilia) o de otras infecciones como brucelosis (neutropenia)
• La desviación a la derecha puede ser por anemia megaloblástica o también se produce en la agonía

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HOJA DE TRABAJO

A) ¿Cuántos tipos de neutrófilos hay según Arneth?
Hay 5 tipos

B) ¿Qué tipo de desviación hay si el IL es igual a 2,5?
El IL estaría en su valor normal (1,9 a 3)

C) ¿De qué enfermedades es típica la desviación a la izquierda con neutrofilia?
Puede ser apendicitis o sepsis, etc

RESULTADOS OBTENIDOS

Tipo 1 = número de neutrófilos: 1
Tipo 2 =     "                  "            3
Tipo 3 =     "                  "            1
Tipo 4 =     "                  "            1
Tipo 5 =     "                  "            3
Tipo 6 =     "                  "            1
Tipo 7 =     "                  "            1
Tipo 8 =     "                  "            1
Tipo 9 =     "                  "            2
Tipo 10=    "                  "            2
Tipo 11=    "                  "            2
Tipo 12=    "                  "            2
Tipo 13=    "                  "            2
Tipo 14=    "                  "            2
Tipo 15=    "                  "            3

Número total de lobulaciones cuantificadas: 27
Índice de lobularidad: 27/15= 1,8

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS

En la sangre estudiada:
Hay una desviación a la izquierda

PRACTICA XXII (8/1/15)

ESTUDIO DE UN CONCENTRADO DE LEUCOCITOS

INTRODUCCIÓN

Las circunstancias donde se encuentra indicada la obtención de un concetrado de leucocitos pueden ser: obtención y estudio microscópico de células patológicas en una leucopenia. Obtención de células en una leucopenia para la realización de pruebas citoquímicas. Obtención de células para la búsqueda del corpúsculo de Barr.
La muestra será sangre venosa anticoagulada con citrato sódico. La proporción adecuada de anticoagulante es de 0,5 ml de citrato sódico al 3,2 % por cada 4,5 ml de sangre venosa.
Cuando se centrifuga sangre anticoagulada a una velociad y durante un tiempo adecuados, se obtienen 3 capas o fracciones:
En la capa inferior de color rojo están presentes los eritrocitos. La capa media de color blanco y escaso espesor (buffy coat o capa leucoplaquetaria) está constituida por leucocitos y plaquetas. La capa superior, transparente y de color ambarino, es el plasma.

Imagenes realizadas en el laboratorio


MATERIAL

• Tubo de centrífuga
• Centrífuga
• Pipeta Pasteur fina
• Portaobjetos

Imagen realizada en el laboratorio

REACTIVOS

• Necesarios para efectuar la tinción hematológica seleccionada, hemos empleado la tinción de panóptico rápido

Imagen realizada en el laboratorio


TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Mezclar la sangre y el anticoagulante
• Centrifugar la sangre anticoagulada a 1500 rpm y 15minutos, mejor el día 9 de enero probamos a centrifugarla  3000 rpm durante 20 minutos y se observó mejor y como nota en el hospital lo hacen 3500 rpm durante 10 minutos
• Retiramos el sobrenadante obtenido (plasma)
• Recoger 0,2 a 0,3 ml de la capa leucoplaquetaria
• Extender sobre un portaobjetos varias gotas de la misma
• Y por último, le aplicamos la tinción hematológica siguiendo el debido procedimiento

OBSERVACIÓN

Nos permite ver el estudio de numerosos leucocitos de todos los tipos, como la visualización de plaquetas

 

 

 

https://www.google.es/search?q=observacion+microscopica+concentrado+leucocitos&biw=1280&bih=705&source=lnms&

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Imagen realizada en el laboratorio

 

HOJA DE TRABAJO

 

 

A) ¿Cómo se llama a a la condensación del material genético inactivado de un cromosoma X?

Obtención de células para la búsqueda del corpúsculo de Barr

 

B) ¿Qué otro nombre recibe la capa leucoplaquetaria?

Buffy coat

 

C) Tras centrifugar la sangre, ¿en qué capa se sitúan los hematíes?

En la capa inferior

 

 

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS

 

En la sangre estudiada:

 

No hay leucocitos con alteraciones

PRACTICA XXI (21/11/14)

RECUENTO DE HEMATIES

INTRODUCCIÓN

El recuento de hematíes o RBC consiste en la determinación del número de eritrocitos presentes en un volumen determinado de sangre (1 mm3)
Esta práctica la realizaremos en una cámara de glóbulos rojos, se diluye la sangre problema en un líquido apropiado y posteriormente se deposita en la cámara de recuento, donde se cuentan las células presentes en algunos cuadrados de uno de los retículos.
La muestra será sangre capilar obtenida por punción del pulpejo de un dedo o sangre venosa procedente de una punción venosa y anticoagulada con EDTA.


MATERIAL

• Pipeta diluidora de Thoma, para recuento de glóbulos rojos
• Un tubo de goma con boquilla, adaptable a la pipeta diluidora
• Cámara de recuento, con un retículo tipo Neubauer mejorado
• Un cubre
• Microscopio

 

 

https://www.google.es/search?q=CAMARA+DE+RECUENTO+NEUBAUER+LABORATORIO&biw=1280&bih=705&source

=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=dzq9VNeePIX9UIP7g4AK&ved=0CAYQ_AUoAQ&dpr=1#tbm=is

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REACTIVOS

• Líquido de dilución, el más utilizado es el de Hayen, que se compone de:
• 2,5 g de sulfato sódico
• 0,5 g d cloruro sódico
• 0,25 g de cloruro mercúrico
• 100ml de agua destilada

 

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Situar el cubre sobre el retículo de la cámara, para facilitar su adhesión humedecemos con agua (H2O)
• Aspirar la sangre hasta 0,5
• Limpiar cuidadosamente el exterior de la pipeta con un algodón y sin hacer bajar el nivel de sangre
• Aspirar líquido diluyente hasta la señal 101
• Desenganchar el tubo de goma de la pipeta y homogeneizar el contenido del bulbo. Para ello se sujeta la pipeta por sus extremos, con los dedos pulgar e índice, y se agita 2 ó 3 minutos
• Desechar las 3 primeras gotas emitidas, éstas no estan mezcladas con sangre
• Depositar la gota entre la cámara y el cubre, se realiza ubicándola en uno de los bordes no adheridos del cubre y dejándola que penetre por capilaridad, hay que evitar que se formen burbujas y que rebose la sangre diluida por fuera de los bordes del cubre
• Se coloca la pipeta en posición casi vertical, se sitúa la punta de la pipeta en el borde apropiado, se disminuye algo la presión ejercida por el dedo índice sobre el otro extremo de la pipeta y se retira ésta justo antes de que se llene el espacio comprendido entre el cubre y la cámara
• Dejar reposar la sangre diluida, contenida en la cámara, durante unos minutos, para que las células presentes en ella puedan sedimentarse
• Enfocar el retículo con el objetivo de 40 x y con el condensador a baja altura
• Contar los hematíes que hay en los 4 cuadrados medianos de las esquinas y en el del centro
• Nota: para evitar contar los mismos hematíes, sólo se cuentan los que están contenidos dentro del cuadrado y los que están en contacto con sus líneas de demarcación superior o derecha, se sigue el orden de "zig-zag"

 

OBSERVACIÓN

 

RBC= H x 5 x 10 x D

 

RBC: recuento de hematíes

H: hematíes contados en 5 cuadrados

D: factor dilución

 

El margen de error de esta técnica es alto (un +/-20)

 

La disminución del RBC se produce en las anemias y su aumento se da en las policitemias.

Se considera normal un RBC comprendido entre los 4 y los 5,5 millones/mm3 en las mujeres, y entre los 4,5 y los 6 millones/mm3 en los varones.

 

 

 

 

https://www.google.es/search?q=observacion+hemat%C3%ADes+camara+recuento&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=BobjVIbiN8X

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https://www.google.es/search?q=observacion+hemat%C3%ADes+camara+recuento&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=BobjV

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EJERCICIOS DE AUTOEVALUACIÓN (20/11/14)

1. En una cámara de recuento, ¿cuánto están sobreelevadas las dos bandas laterales con respecto a la central domde está grabado el retículo?

a. 0,1 mm

2. ¿Cómo debe ser el líquido de dilución utilizado para el recuento de hematíes?

b. Isotónico

3. En algunos recuentos electrónicos, a la menor dilución de la muestra de sangre se le añaden varias gotas de un reactivo que puede contener cianuro y un detergente no iónico. Este reactivo debe actuar durante unos minutos y produce:

c. Las dos respuestas anteriores son correctas

4. ¿En qué componente de un contador electrónico se cuentan, realmente, las células sanguíneas?

a. Dispositivo de medida

5. ¿Cuál no es un método electrónico de recuento celular?

b. Método de la reflexión de la luz ultravioleta

6. ¿Qué enzima se cuantifica, en algunos autoanalizadores hematológicos, para clasificar a los leucocitos?

d. Peroxidasa

7. Cuando una cámara de recuento, tipo Neubauer mejorada, está montada, ¿qué volumen de sangre diluida hay a nivel de 5 cuadrados medianos contenidos en el cuadrado central del retículo?

d. 0,02 mm3

PRACTICA XX (20/11/14)

 

VISUALIZACIÓN CÁMARA DE RECUENTO

INTRODUCCIÓN

La cámara de Neubauer es un instrumento utilizado en medicina y biología para realizar el recuento de células en un medio líquido, que puede ser un cultivo celular, sangre, orina, líquido cefalorraquídeo, líquido sinovial, etc.

Esta cámara de recuento está adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente deprimidas en cuyo fondo se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula de dimensiones conocidas. Se cubre la cámara con un cubreobjetos que se adhiere por simple tensión superficial (en especial una vez que se haya añadido la muestra líquida).
Luego se introduce, por capilaridad entre la cámara y el cubre, el líquido con las células a contar, generalmente tras una dilución previa; puesto que la cámara tiene dos zonas esto permite hacer dos recuentos simultáneamente. Se observa la retícula al microscopio con el aumento adecuado y se cuentan las células

http://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A1mara_de_Neubauer


MATERIAL

• Microscopio
• Cámara de recuento con un retículo de Neubauer mejorado

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

1. Observar con el microscopio el retículo de la cámara de recuento:

• Primero, con el objetivo de pequeño aumento (4x)
• Luego, con el objetivo de mediano aumento (10x)
• Después, con el objetivo de gran aumento (40x)

2. Enfocar, con el objetivo de 10x, uno de los cuadrados grandes situados en las cuatro esquinas del retículo.
Contar el número de cuadrados medianos contenidos en ese cuadrado periférico: (16 cuadros)

Teniendo en cuenta que la longitud de cada uno de los lados del retículo es de 3 mm, calcular:

• La longitud de los lados de cada cuadrado grande periférico: 1mm
• La longitud de los lados de cada uno de los cuadrados medianos englobados en un cuadrado grande periférico: 0,25mm

Teniendo en cuenta que la longitud del espacio comprendido entre el retículo y el cubre es de 0,1 mm, calcular el volumen de sangre diluida que hay en la cámara de recuento montada, a nivel de:

• El retículo entero: 0,1 x 9= 0,9 mm3
• Un cuadrado grande periférico: 0,1 x 1= 0,1 mm3
• Un cuadrado mediano incluido en un cuadrado grande periférico: 0,1 x 0,25 elevado a 2 = 0,000625

3. Enfocar, con el objetivo de 10 x, el cuadrado grande central:
Contar el número de cuadrados medianos contenidos en ese cuadrado grande central: (25 cuadros)
Contar el número de cuadrados pequeños englobados en uno de esos cuadrados medianos: (16 cuadros)

Teniendo en cuenta que la longitud d cada uno de los lados del retículo es de 3 mm, calcular:

• La longitud de los lados del cuadrado grande central: 1mm
• La longitud de los lados de cada uno de los cuadrados medianos incluidos en el cuadrado grande central: 0,20 mm
• La longitud de los lados de cada uno de los cuadrados pequeños contenidos en uno de esos cuadrados medianos: 0,05 mm

Teniendo en cuenta que la longitud del espacio comprendido entre el retículo y el cubre es de 0,1 mm, calcular el volumen de sangre diluida que hay en la cámara de recuento montada, a nivel de:

• El cuadrado grande central: 0,1 mm x 1mm elevado a 2= 0,1mm3
• Un cuadrado mediano englobado en el cuadrado  grande central: 0,1 mm x 0,20 elevado a 2 = 0,004mm3
• Un cuadrado pequeño incluido en uno de esos cuadrados medianos: 0,1 x 0,05mm elevado a 2 = 0,00025mm3