PRACTICA XX (20/11/14)

 

VISUALIZACIÓN CÁMARA DE RECUENTO

INTRODUCCIÓN

La cámara de Neubauer es un instrumento utilizado en medicina y biología para realizar el recuento de células en un medio líquido, que puede ser un cultivo celular, sangre, orina, líquido cefalorraquídeo, líquido sinovial, etc.

Esta cámara de recuento está adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente deprimidas en cuyo fondo se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula de dimensiones conocidas. Se cubre la cámara con un cubreobjetos que se adhiere por simple tensión superficial (en especial una vez que se haya añadido la muestra líquida).
Luego se introduce, por capilaridad entre la cámara y el cubre, el líquido con las células a contar, generalmente tras una dilución previa; puesto que la cámara tiene dos zonas esto permite hacer dos recuentos simultáneamente. Se observa la retícula al microscopio con el aumento adecuado y se cuentan las células

http://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A1mara_de_Neubauer


MATERIAL

• Microscopio
• Cámara de recuento con un retículo de Neubauer mejorado

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

1. Observar con el microscopio el retículo de la cámara de recuento:

• Primero, con el objetivo de pequeño aumento (4x)
• Luego, con el objetivo de mediano aumento (10x)
• Después, con el objetivo de gran aumento (40x)

2. Enfocar, con el objetivo de 10x, uno de los cuadrados grandes situados en las cuatro esquinas del retículo.
Contar el número de cuadrados medianos contenidos en ese cuadrado periférico: (16 cuadros)

Teniendo en cuenta que la longitud de cada uno de los lados del retículo es de 3 mm, calcular:

• La longitud de los lados de cada cuadrado grande periférico: 1mm
• La longitud de los lados de cada uno de los cuadrados medianos englobados en un cuadrado grande periférico: 0,25mm

Teniendo en cuenta que la longitud del espacio comprendido entre el retículo y el cubre es de 0,1 mm, calcular el volumen de sangre diluida que hay en la cámara de recuento montada, a nivel de:

• El retículo entero: 0,1 x 9= 0,9 mm3
• Un cuadrado grande periférico: 0,1 x 1= 0,1 mm3
• Un cuadrado mediano incluido en un cuadrado grande periférico: 0,1 x 0,25 elevado a 2 = 0,000625

3. Enfocar, con el objetivo de 10 x, el cuadrado grande central:
Contar el número de cuadrados medianos contenidos en ese cuadrado grande central: (25 cuadros)
Contar el número de cuadrados pequeños englobados en uno de esos cuadrados medianos: (16 cuadros)

Teniendo en cuenta que la longitud d cada uno de los lados del retículo es de 3 mm, calcular:

• La longitud de los lados del cuadrado grande central: 1mm
• La longitud de los lados de cada uno de los cuadrados medianos incluidos en el cuadrado grande central: 0,20 mm
• La longitud de los lados de cada uno de los cuadrados pequeños contenidos en uno de esos cuadrados medianos: 0,05 mm

Teniendo en cuenta que la longitud del espacio comprendido entre el retículo y el cubre es de 0,1 mm, calcular el volumen de sangre diluida que hay en la cámara de recuento montada, a nivel de:

• El cuadrado grande central: 0,1 mm x 1mm elevado a 2= 0,1mm3
• Un cuadrado mediano englobado en el cuadrado  grande central: 0,1 mm x 0,20 elevado a 2 = 0,004mm3
• Un cuadrado pequeño incluido en uno de esos cuadrados medianos: 0,1 x 0,05mm elevado a 2 = 0,00025mm3