RECUENTO DE HEMATIES
INTRODUCCIÓN
El recuento de hematíes o RBC consiste en la determinación del número de eritrocitos presentes en un volumen determinado de sangre (1 mm3)
Esta práctica la realizaremos en una cámara de glóbulos rojos, se diluye la sangre problema en un líquido apropiado y posteriormente se deposita en la cámara de recuento, donde se cuentan las células presentes en algunos cuadrados de uno de los retículos.
La muestra será sangre capilar obtenida por punción del pulpejo de un dedo o sangre venosa procedente de una punción venosa y anticoagulada con EDTA.
MATERIAL
- Pipeta diluidora de Thoma, para recuento de glóbulos rojos
- Un tubo de goma con boquilla, adaptable a la pipeta diluidora
- Cámara de recuento, con un retículo tipo Neubauer mejorado
- Un cubre
- Microscopio
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REACTIVOS
- Líquido de dilución, el más utilizado es el de Hayen, que se compone de:
- 2,5 g de sulfato sódico
- 0,5 g d cloruro sódico
- 0,25 g de cloruro mercúrico
- 100ml de agua destilada
TÉCNICA O PROCEDIMIENTO
- Situar el cubre sobre el retículo de la cámara, para facilitar su adhesión humedecemos con agua (H2O)
- Aspirar la sangre hasta 0,5
- Limpiar cuidadosamente el exterior de la pipeta con un algodón y sin hacer bajar el nivel de sangre
- Aspirar líquido diluyente hasta la señal 101
- Desenganchar el tubo de goma de la pipeta y homogeneizar el contenido del bulbo. Para ello se sujeta la pipeta por sus extremos, con los dedos pulgar e índice, y se agita 2 ó 3 minutos
- Desechar las 3 primeras gotas emitidas, éstas no estan mezcladas con sangre
- Depositar la gota entre la cámara y el cubre, se realiza ubicándola en uno de los bordes no adheridos del cubre y dejándola que penetre por capilaridad, hay que evitar que se formen burbujas y que rebose la sangre diluida por fuera de los bordes del cubre
- Se coloca la pipeta en posición casi vertical, se sitúa la punta de la pipeta en el borde apropiado, se disminuye algo la presión ejercida por el dedo índice sobre el otro extremo de la pipeta y se retira ésta justo antes de que se llene el espacio comprendido entre el cubre y la cámara
- Dejar reposar la sangre diluida, contenida en la cámara, durante unos minutos, para que las células presentes en ella puedan sedimentarse
- Enfocar el retículo con el objetivo de 40 x y con el condensador a baja altura
- Contar los hematíes que hay en los 4 cuadrados medianos de las esquinas y en el del centro
- Nota: para evitar contar los mismos hematíes, sólo se cuentan los que están contenidos dentro del cuadrado y los que están en contacto con sus líneas de demarcación superior o derecha, se sigue el orden de "zig-zag"
OBSERVACIÓN
RBC= H x 5 x 10 x D
RBC: recuento de hematíes
H: hematíes contados en 5 cuadrados
D: factor dilución
El margen de error de esta técnica es alto (un +/-20)
La disminución del RBC se produce en las anemias y su aumento se da en las policitemias.
Se considera normal un RBC comprendido entre los 4 y los 5,5 millones/mm3 en las mujeres, y entre los 4,5 y los 6 millones/mm3 en los varones.
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