PRÁCTICA X (7/11/14)

 

TINCIÓN SUPRAVITAL CON AZUL DE METILENO

INTRODUCCIÓN

Al investigar las estructuras celulares podemos utilizar dos formas diferentes de tinción, aquellasa que se hacen con tejido muerto y las que utilizan células vivas o tejidos para su observación.
Entre las células vivas podemos diferenciar: las tinciones vitales: introducción de un colorante en la circulación de un organismo vivo. Tinciones supravitales: emplean el colorante sobre células o tejidos vivos aislados del organismo. En ambos casos lo que se destaca es los elementos de la célula viva y seguir los procesos vitales en el interior.
Vamos a teñir con azul de metileno que permite ver núcleos y algunas estructuras celulares.
Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada.


MATERIAL

• Microscopio
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Tubos de hemólisis
• Pipetas Pasteur
• Lancetas
• Alcohol
• Gasa
• Vidrio de reloj
• Balanza
• Matraz aforado
• Varilla
• Vaso de precipitado
• Papel parafilm
• Agua destilada
• Embudo

REACTIVOS

• Azul de metileno 0,5 g
• Oxolato potásico 1,6 g

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Primeramente preparamos el colorante, 0,5 g de azul de metileno, 1,6 g de oxolato potásico, lo ponemos sobre el vidrio de reloj, taramos la balanza y lo pesamos despues lo depositamos en la suficiente cantidad  de agua destilada en un vaso de precipitado
• Lo mezclamos todo con la varilla
• Vertimos nuestra disolución a un matraz aforado de 100ml con un embudo
• Con ayuda de una pipeta Pasteur aforamos el matraz
• Le ponemos papel parafilm lo movemos y lo dejamos 10 minutos
• Ahora desinfectamos bien la zona para extraer sangre capilar con alcohol y con ayuda de una gasa, movemos la mano y utilizamos la lanceta
• Desechamos la primera gota de sangre
• Colocamos la sangre en un portaobjetos o bien en un tubo de hemólisis, en este caso lo hizimos al tubo de hemólisis para mezclar bien con nuestra disolución
• Vertimos unas gotas de nuestra disolución junto con la sangre en el tubo y lo tapamos con papel parafilm durante 10 minutos
• Colocamos unas gotas sobre un porta cubriendo con un cubreobjetos
• Nos dirigimos a su observación microscópica

OBSERVACIÓN

A diferencia de nuestra anterior práctica de preparar sangre en fresco, con esta ya teñida podemos diferenciar leucocitos. La observación debe ser rápida ya que las células no permanecen vivas mucho tiempo.



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supravital+azul+metileno+sangre+en+fresco

HOJA DE TRABAJO

A) ¿ En qué se diferencia una tinción vital de una supravital? 
La vital es la que se introduce dentro del organismo vivo  y la  tinción supravital es con el tejido aislado del organismo

B) ¿Cuáles son los colorantes vitales más utilizados? 
El rojo neutro, el verde jano y el azul de metileno

C) ¿Qué tipo de estructuras tiñe selectivamente el verde jano? 
Las mitocondrias y orgánulos celulares

D) ¿Cuáles son las ventajas de una tinción supravital? 
Permiten la observación sobre células o tejidos vivos y seguir los procesos vitales en el interior de la misma

E) ¿Cuáles son los inconvenientes?
 No permanecen vivas mucho tiempo al estar separadas de su organismo.