TINCIÓN DE GIEMSA
INTRODUCCIÓN
Aquí utillizaremos sangre capilar fresca o venosa anticoagulada, el anticoagulante es la heparina o EDTA, ya que el citrato sódico y el oxalato potásico pueden dar preparaciones defectuosas. Utilizaremos azul de metileno y eosina propuesta por Giemsa.
Es un extracto de las técnicas de tinción hematológicas de la casa Panreac.
Obtendremos una tinción diferencial, que es capaz de discriminar entre las distintas estructuras celulares según se tiñan éstas con el colorante ácido, eosina, con el básico azul de metileno, o con la mezcla de ambos.
MATERIAL
- Microscopio
- Portaobjetos
- Cristalizador
- Puentes de tinción
- Pipeta graduada de 2ml
- Pipetas Pasteur
- Tubos de ensayo
REACTIVOS
- Colorante en solución según Giemsa de Panreac
- Solución tampón pH 7,2 de Panreac
- Metanol
- Aceite de inmersión
TÉCNICA O PROCEDIMIENTO
- Preparamos la extensión sanguínea
- Lo cubrimos con metanol durante 3 minutos, así se fijará el frotis
- Nos indican que preparemos en la pipeta graduada de 2ml la solución de Giemsa con pH 7,2 pero nos encontramos frente a su difícil lavado entonces, cojemos un vaso de precipitado y cojemos con la pipeta de 2ml agua, y vertemos en el vaso 0,2 ml que serían 7 gotas, proceemos a cogerlo con la pipeta Pasteur 7 gotas de Giemsa y lo vertemos al tubo de ensayo con 2ml de pH 7,2
- Esta dilución es importante hacerlo en el día porque no sería válido para otro día
- Mezclamos suavemente con ayuda de nuestra pipeta Pasteur
- Cubrimos el frotis durante 25 minutos
- Escurrimos bien y lavamos con agua destilada del frasco lavador, hasta que el agua salga limpia
- Dejamos secar en posición vertical
- Nos dirigimos a la observación microscópica
OBSERVACIÓN
Con ayuda de aceite de inmersión lo examinamos en el objetivo de 100x. Los eritrocitos se tiñen de color rosa asalmonado y las plaquetas de color violeta.
Los neutrófilos presentan el núcleo de color azul violeta, el citoplasma rosa y la granulación de un color violeta rojizo.
Los eosinófilos se observan con el núcleo azul violeta, citoplasma azul y los gránulos de color rojo anaranjado.
Los basófilos presentan núcleo de color púrpura y granulación de color azul oscuro.
Y los monocitos y linfocitos se observan con un núcleo color violeta y el citoplasma azul, un poco más claro en el monocito.
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HOJA DE TRABAJO
A) ¿Cuáles son los anticoagulantes más adecuados para esta técnica?
EDTA o Heparina
B) ¿Con qué reactivo fijamos el frotis?
Metanol
C) ¿Cuánto tiempo debe actuar el colorante en el frotis?
Sobre 25 minutos.
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