CONTAJE DE RETICULOCITOS
INTRODUCCIÓN
Utilizamos sangre capilar, debido a que los reticulocitos también maduran in vitro, es aconsejable que la sangre se haya extraído como máximo 6horas antes de su análisis
Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros que contienen, un retículo o red cromatínica formada por restos de ARN (ribosomas, mitocondrias y órganos celulares)
Su tamaño es de 8 a 9 nm de diámetro, permanecen en médula ósea unos 2 a 4 días y después salen a sangre periférica, donde terminan el proceso de maduración en unas 24h
Según el grado de maduración que posea el reticulocito presentará un modelo de retículo distinto, de ovillo denso en el caso de los más inmaduros o de gránulos escasos para los más maduros. Se pueden clasificar en cuatro grupos
Podemos observarlos mediante la tinción con colorantes vitales, azul de metileno nuevo o azul de cresil brillante. Estos colorantes dan lugar a la precipitación de los restos de ARN, y se observan como filamentos de color azul intenso en el interior de la célula.
MATERIAL
- Microscopio
- Tubos de hemólisis
- Pipetas Pasteur
- Portaobjetos
- Baño de agua
- Sistema de filtración
- Frasco lavador
REACTIVOS
- Azul de cresil brillante en polvo
- Solución salina al 0,9%
- Citrato sódico al 3%
- Aceite de inmersión
TÉCNICA O PROCEDIMIENTO
- Preparamos el colorante: mezclamos 80ml de solución salina y 20ml de citrato sódico al 3%, pesamos 1g de azul de cresil brillante y lo disolvemos en la mezcla anterior, lo filtramos antes de usarlo
- Tinción de los reticulocitos: es una tinción supravital para ello echamos 3 gotas de solución colorante en un tubo de hemólisis y otras 3 gotas de sangre total monogeneizada
- Mezclamos y tapamos con papel parafilm
- Introducimos en el baño de agua a 37ºC durante 5 minutos
- Volvemos agitar y tomamos una gota para depositarla en un porta
- Realizamos la extensión y la dejamos secar
Limpieza de portaobjetos y cubreobjetos
Primero lavamos con agua y jabón, aclaramos con agua destilad y lo colocamos en un recipiente con alcohol.
OBSERVACIÓN
Lo observamos con el objetivo de 100x con ayuda del aceite de inmersión. Los hematíes se habrán teñido de color verde azulado y los reticulocitos se diferencian porque presentan en su interior unos hilos finos de color azul.
Se deben contar en total 2000 hematíes
%reticulocitos=nºreticulocitos contados/nºde hematíes contados x 100
https://www.google.es/search?q=tinci%C3%B3n+sangre+panoptico+rapido&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X
&ei=yIyFVPLJE8mqU5yIgvgP&ved=0CAYQ_AUoAQ#tbm=isch&q=observacion+
microscopica+reticulocitos&imgdii=_
En adultos y niños los valores normales están en 0,5 y 1,5%
Se produce reticulopenia o disminución en la cifra de reticulocitos, en casos de aplasia medular, anemia ferropénica, anemia megaloblástica y anemias que cursan con dificultad en la eritropoyesis.
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Por el contrario, hay reticulocitosis en anemias hemolíticas y post-hemorrágicas, donde se aumente el nivel de producción de hematíes para contrarrestar su pérdida.
La cantidad de reticulocitos expresada en tanto por ciento es un valor relativo referido a una cifra normal de hematíes. Cuando existe una anemia con disminución en la cantidad de hematíes se compensa con un aumento en el número de reticulocitos y debemos corregir su valor en tanto por ciento para poder consideralo real.
La correción se hace en base al valor HTO del paciente, y se calcula:
%reticulocitos corregido=%reticulocitos x HTOpaciente/HTO normal
Si existe una anemia muy intensa, aparece en sangre periférica un número de reticulocitos mayor del que correspondería por regeneración eritroblástica. Esto se debe a que el estímulo eritropoyético compensador va acompañado de un período de maduración intramedular más corto y una etapa de maduración en sangre periférica más larga.
Esto se conoce como "desviación reticulocitaria" y se observa en el frotis por la aparición de hematíes grandes con un color azulado. Para evitar pensar que hay una capacidad regenerativa medular intensa se debe hacer una segunda correción del % de reticulocitos en función de los días que tarda en madurar el reticulocito en sangre periférica, y a eso se llama índice de producción reticulocitaria (IPR)
IPR= %reticulocitos corregido/ días maduración en sangre periférica
El IPR nos da un valor numérico de la estimulación hematopoyética por encima de la actividad de la línea base normal.
Un IPR mayor de 3 nos indica un aumento de la actividad eritropoyética medular, mientras que un IPR menos de 2 indica una escasa actividad eritropoyética.
HOJA DE TRABAJO
A) ¿Qué son los reticulocitos?
Son eritrocitos inmaduros que contienen una red cromatínica formas por restos de ARN (ribosomas, mitocondrias y órganos celulares), permanecen en médula ósea 2-4 días, su tamaño es de 8 a 9 nm
B) ¿Qué tipo de tinción estamos utilizando?
Con colorantes vitales, azul de metileno nuevo o azul de cresil brillante
C) ¿Por qué hacemos la correción del porcentaje de reticulocitos?
Cuando existe anemia con disminución en la cantidad de hematíes se compensa con una aumento en el número de reticulocitos y debemos corregir su valor en tanto por ciento para poder considerarlo real.
D) ¿Qué nos expresa el IPR?
Expresa un valor numérico e la estimulación hematopoyética por encima de la actividad de la línea base normal. Un IPR mayor de 3 nos indica una umento de la actividad eritropoyética medular, mientras que un IPR menor de 2 nos indica una escasa actividad eritropoyética.
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