PRACTICA XXXI (29/01/15)

ELECTROFORESIS DE HEMOGLOBINA

MATERIAL

• Tiras de cellogel 2,5x17cm. Cod 01ª11-25 (ATUM 27185). Si se gasta el líquido de la bolsa se rellena con metanol
• Aplicador de electroforesis semimicro
• Rodillo
• Bandeja
• Fuente de alimentación/cubeta/puente
• Placa de vidrio

REACTIVOS

• Suero fisiológico
• Agua destilada
• Solución decolorante: Solución Ácido acético 5%
• Solución transparentadora de electroforesis (metanol, ciclohexanona, ac acético glacial)
• Una vez mezclamos la solución A y B caduca a los 15 días
• Cloroformo
• Metanol
• Tampon o buffer Tris-hippurate. Cod 02c11-12. Ph 8,8 cellogel
• Colorante: Negro amido o rojo

Imagen reallizada en el laboratorio

 

 

 

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA (hemolizado)

• Anticoagular la sangre problema
• Poner 3ml de sangre problema en 2 tubos de centrifuga de cristal conicos graduados
• Centrifugar 3000rpm/5min. Retirar el sobrenadante
• Poner 4-5ml de suero fisiológico, homogeneizar y volver a centrifugar 3000rpm/5min
• Lavar 3 veces mas (en total 4 lavados)
• En el último lavado nos quedamos con el sedimento (aprox 1ml)
• Al sedimento (volumen) le añadimos 1/2 volumen de cloroformo y 1,5 volumenes de agua destilada. Ejemplo: 1ml de sangre sedimentada + 0,5 ml de cloroformo + 1,5 ml de agua destilada.
• Agitar la mezcla en el agitador de tubos vibratorio
• Centrifugar 3000rpm/20min
• Coger el sobrenadante que será nuestra muestra con la que trabajaremos

ELECTROFORESIS

• Colocar la fuente de alimentación, la cubeta y los electrodos correctamente
• Colocación de cables: rojo (anodo)+ y negro (catodo -)
• Poner solucion tampon en la cubeta
• Sacamos la tira de cellogel con las pinzas con cuidado de no verter el líquido de conservación de las tiras.
• Colocar la tira en el tampon para que empape bien 10min
• Sacar las tiras de cellogel y secarlas con papel de filtro
• Montar el puente: Poner la cara absorbente hacia arriba (poner la esquina cortada en la derecha y mirando hacia el operador). Los 2 extremos de la tira deben tocar la solución tampón
• Para meter la tira en el puente: meter los 2 extremos de la tira por las ranuras del puente

APLICACIÓN DE LA MUESTRA

• Para colocar la muestra, tener en cuenta que el hemolizado tendra que ir del catodo al anodo

https://www.google.es/search?q=determinacion+de+hemoglobina&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=rL

zsVMXBHoH-UProgvgK&ved=0CAYQ_AUoAQ#tbm=isch&q=electroforesis+de+hemoglobina&imgdii=_&imgr

c=zeyjXJOq6LwUpM%253A%3Bj-8GzmDIdI-cZM%3Bhttp%253A%252F%252F1.bp.blogspot.com%252F-HmO1LKrFTyk%252FTjHRdtSdTqI%252FAAAAAAAAAWs%252FBx7EgvysE9E%252Fs1600%252F26.jpg%3Bhttp%253A%252F%252Fsaberprimerosauxilios.blogspot.com%252F2011%252F07%252Fprincipios-mendelianos.html%3B461%3B243

 

• Para ello, poner unas gotas de bemolizado (sobrenadante) sobre un porta y con el aplicador mojamos para coger muestra y dejamos la muestra sobre la tira de celogel aprox a 1,5 cm del extremo catodico y marcamos conn rotulador permanente ese sitio
• Tapamos la cubeta y ponemos en marcha el alimentador (400 voltios/10 min)
• Poner negro amido en la bandeja
• Una vez ha terminado la electroforesis, desconectamos y sacamos la tira del puente con pinzas
• Colocamos la tira boca abajo en el negro amido 10min agitando la bandeja
• Retirar el negro amido de la bandeja, y cubrir la tira con solución de ácido acético 5%
• (Solucion decolocantre) Hacer 3 lavados de 10 minutos con ácido acético
• Quitar el ácido acético y sumergir las tiras en metanol 1 minuto
• Tirar el metanol
• Poner la solución transparentadora 2-3min
• Retirar la solución transparentadora y sacar la tira de la bandeja y colocar encima de una placa de vidrio con la cara absorbente hacia abajo y aplastar con el rodillo
• Meter a la estufa (60-70ºC) hasta que la tira quede transparente del todo (5-6minutos)

NOTAS DE ELECTROFORESIS

• Esta práctica no la he realizado como todas las anteriores ya que se sigue un protocolo hemos observado el día que la realizamos que no hay que poner mucha sangre con una punta de micropipeta
• Las tiras cuando sale del tampón secarlas bien con papel de filtro
• La centrifugación fue realizada a 3500 rpm/10min siendo la última 5minutos
• También nos sirve el rojo punzón, hemos usado el negro amido porque había más
• Cuanto más se separe más tipos de Hb podemos ver
• La siguiente imagen fue realizada en el laboratorio así apreciamos nuestros tipos de Hb:

Imagen realizada en el laboratorio

 

 

 



 

 

 

https://www.google.es/search?q=determinacion+de+hemoglobina&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=rLz

sVMXBHoH-UProgvgK&ved=0CAYQ_AUoAQ#tbm=isch&q=electroforesis+de+hemoglobina&imgdii=_&im

grc=IfuJxz8LH8GJ9M%253A%3BwiPDafBLTfS99M%3Bhttp%253A%252F%252Fimage.slidesharecdn.com%252Fpruebasespecialesparaelestudiodeanemiasenhematologa-110929133017-phpapp01%252F95%252Fpruebas-especiales-para-el-estudio-de-anemias-en-hematologa-47-728.jpg%253Fcb%253D1317322216%3Bhttp%253A%252F%252Fes.slideshare.net%252FBohytron%252Fpruebas-especiales-para-el-estudio-de-anemias-en-hematologa%3B728%3B546

PRACTICA XXX (26/01/15)

CÁLCULO DE LOS ÍNDICES ERITROCITARIOS

INTRODUCCIÓN

Se denominan índices eritrocitarios primarios al hematocrito (HTO), a la concentración de hematíes (RBC) y a la concentración de hemoglobina (Hb)
A partir de ellos podemos obtener los índices eritrocitarios secundarios, que son: el volumen corpuscular medio (VCM), la hemoglobina corpuscular media (HCM) y la concentración corpuscular media de hemoglobina (CHCM)

MATERIAL

• Todo el necesario para realizar las tres prácticas correspondientes ya subidas a nuestro cuaderno de prácticas (HTO) (RBC) Y (Hb)

REACTICOS

• Todo el necesario para realizar las tres prácticas correspondientes ya subidas a nuestro cuaderno de prácticas (HTO) (RBC) Y (Hb)

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Para el RBC hemos contado en total 916 hematíes, por tanto:

RBC= H x 5 x 10 x D
RBC= 4584000 millones/mm3

• Para HTO

Micrométodo= 45%
Regla= 49 en 100; 21 en x; x= 42,85%

• Para Hb

Hemos obtenido 15g/dL

OBSERVACIÓN

• Cálculos

1 Cálculo del volumen corpuscular medio (VCM)

VCM= HTO/RBC x 10
VCM= 45/4584000 x 10
VCM= 98 fl
El valor normal se encuentra entre 80-100fl una disminución, es decir menos de 80 indica microcitosis y un aumento mayor de 100 indica macrocitosis

2 Cálculo de Hb corpuscular media (HCM)

HCM= Hb/RBC x 10
HCM= 15/4584000 x 10
HCM= 32 pg
El valor normal se encuentra entre 27-31 pg una diminución, es decir menos de 27 nos indicaría una hipocromía y un aumento mayor de 31 hipercomía relativa

3 Cálculo concentración corpuscular media de Hb

CHCM= Hb/HTO x 100
CHCM= 15/45 x100
CHCM= 33,3 g/dL
El valor normal se encuentra entre 32-36 g/dL una disminución, es decir menos de 32 nos indica hipocromía y un aumento hipercromía absoluta

Ejemplo: macrocitosis, hipercromía relativa y CHCM normal corresponde anemia megaloblástica por déficit de factor intrínseco, anemia perniciosa o de Addison-Bierner

 

https://www.google.es/search?q=determinacion+de+hemoglobina&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=rL

zsVMXBHoH-UProgvgK&ved=0CAYQ_AUoAQ#tbm=isch&q=indices+eritrocitarios+graciosa&imgdii=_&img

rc=M_OiM-ElIUJQpM%253A%3BbZRS94KO-o9GYM%3Bhttp%253A%252F%252Fwww.diarioelpueblo.com.uy%252Fwp-content%252Fuploads%252F2015%252F01%252Fdonacion-sangre-414x280.jpg%3Bhttp%253A%252F%252Fwww.diarioelpueblo.com.uy%252Fcategory%252Finforme%3B400%3B271

PRACTICA XXIX (2201/15)

 

DETERMINACIÓN SIDEREMIA (HIERRO)

INTRODUCCIÓN

El hierro se asocia del complejo sérico hierro-transferrina en medio ácido débil
Fe libre se reduce a ión ferroso mediante el ácido ascórbico
Iones ferrosos en presencia de FerroZine forma complejo coloreado
Fe constituyente de un gran nº enzimas
Inmunoglobulina contiene Fe, así como el hígado
Fe necesario para la producción de hemoglobina
Un déficit de hierro da anemia ferropénica
Los niveles elevados: hemocromatosis, cirrosis...
La variación día a día es común en poblaciones sanas
La muestra sería suero o plasma heparinizado. Libre de hemólisis. Separado lo antes posible de los hematíes. Estabilidad de la muestra: el hierro es estable de 7 días a 2-8ºC

https://www.google.es/search?q=determinacion+de+hemoglobina&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=r
LzsVMXBHoH-UProgvgK&ved=0CAYQ_AUoAQ#tbm=isch&q=hierro+molecula&imgdii=_&imgrc=Yyw9Koxx--IolM%253A%3B6Rd6TIapRuVSFM%3Bhttp%253A%252F%252Fwww.monografias.com%252Ftrabajos70%252Fconglomerados-sulfuro-sintesis-hem%252Fimage020.jpg%3Bhttp%253A%252F%252Fwww.monografias.com%252Ftrabajos70%252Fconglomerados-sulfuro-sintesis-hem%252Fconglomerados-sulfuro-sintesis-hem2.shtml%3B450%3B289


MATERIAL

• 4 tubos de ensayo
• 2 pipetal de 1ml
• 1 pipeta automática 200 microlitros
• Espectofotómetro
• Cubetas de 1,0 cm de paso de luz

https://www.google.es/search?q=determinacion+de+hemoglobina&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=rLz

sVMXBHoH-UProgvgK&ved=0CAYQ_AUoAQ#tbm=isch&q=espectofotometro&imgdii=_&imgrc=JdYACyTd

GhoaGM%253A%3BZNegq-6QCgYh6M%3Bhttp%253A%252F%252Fwww.auxilab.es%252Fimagenes%252Ffotos%252Fespectrofotometros%252F54255050.jpg%3Bhttp%253A%252F%252Fwww.auxilab.es%252Fes%252Fcatalogo%252Fespectrofotometria_espectrofotometros_uv-vis.aspx%3B400%3B266

REACTIVOS

• R1 Tampón: Acetato pH 4,9                   100mmol/L
• R2 Reductor: Ácido ascórbico                  99,7%
• R3 Color: FerroZine                                  40mmol/L
• IRONCAL: Patrón primario acuoso de Hierro                   100microgramos/dL

Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos: Presencia de partículas y turbidez. Absorbancia del Blanco a 562nm >- 0,020

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• 1.-Condiciones del ensayo:
• Longitud de onda: 562 nm (530-590)
• Cubeta: 1cm paso de luz
• Temperatura: 37ºC/15-25ºC
• 2.-Ajustar el espectofotómetro a cero frente a agua destilada
• 3.- Pipetear en una cubeta
•                                        Blanco RT           Patrón             Blanco Muestra          Muestra
• RT (ml)                              1,0                     1,0                       1,0                          1,0
• R3(gotas)                             1                        1                                                         1
• Agua destilada (microlitros) 200
• Patrón (microlitros)                                      200
• Muestra (microlitros)                                                                200                          200
• 4.-Mezclar e incubar 5min a 37ºC o 10min a temperatura ambiente
• 5.-Leer las absorbancias del Patrón y la muestra frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30minutos

OBSERVACIÓN

• Cálculos

(A) Muestra - (A) Blanco de Muestra/ (A) Patrón x 100 (Conc Patrón) = microgramos/dL hierro

• Factor de conversión:

microgramos/dL x 0,179 =mmol/L

• Valores de referencia:

Hombres: 65-175 microgramos/dL
Mujeres: 40-150 microgramos/dL
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia

• Resultados:

(A) Blanco 0,051
(A) Patrón 0,106
(A) Blanco Muestra 1,566
(A) Muestra 1,570

1,570-1,566/0,106x100= 0,037mg/dL
Resultado: 3,77 no válido ya que hemos cogido sangre de la bolsa y debería de ser fresca

PRACTICA XXVIII (19/01/15)

DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA EN SANGRE

INTRODUCCIÓN

Es el paso fundamental en el diagnóstico de las anemias
Es oxidada por la acción del ferricianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianmetahemoglobina.
La hemoglobina es una proteína que contiene hierro. Otorga el color rojo a la sangre, es una heteroproteína (ferroproteína) compuesta por dos porciones, la primera no proteica (hemo) y la segunda proteica (globina). La globina la compone la hemoglobina A por dos cadenas alfa y dos beta, la hemoglobina A2 por dos cadenas alfa y dos delta y por último la fetal que la componen dos cadenas alfa y dos gamma
Se encuentra en los glóbulos rojos y se encarga de transportar oxígeno por la sangre desde los pulmones hasta los tejidos
Por debajo valores normales: anemias, cáncer, embarazo...
Por alto valores normales: cardiopatías, deshidratación, estancias a gran altitud
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio
La muestra será de sangre capilar o venosa (anticoagulantes como EDTA, heparina u oxalato)
La estabilidad de la muestra es 1 semana a 2-8ºC

https://www.google.es/search?q=hemoglobina&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=fLLsVMb2BYj7UOT

VgJAG&ved=0CAYQ_AUoAQ#imgdii=_&imgrc=ivZX6tt5_1T4MM%253A%3BSXiBU6IRwsWp_M%3Bhttp%253A%252F%252Fupload.wikimedia.org%252Fwikipedia%252Fcommons%252Fthumb%252Fb%252Fbe%252FHeme_b.svg%252F220px-Heme_b.svg.png%3Bhttp%253A%252F%252Fes.wikipedia.org%252Fwiki%252FHemoglobina%3B220%3B243

 

 

MATERIAL

• Tubos de ensayo
• Pipetas
• Espectofotómetro
• Cubetas (1,0 cm de paso de luz)

 

https://www.google.es/search?q=determinacion+de+hemoglobina&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=rL

zsVMXBHoH-UProgvgK&ved=0CAYQ_AUoAQ#tbm=isch&q=determinacion+de+hemoglobina+espectofotomet

ro&imgdii=Q10ugI_wTR2uMM%3A%3BLt95kcf2HaCMGM%3BQ10ugI_wTR2uMM%3A&imgrc=Q10ugI_wTR2uMM%253A%3BWIQcm_G9ob8VHM%3Bhttp%253A%252F%252Fupload.wikimedia.org%252Fwikipedia%252Fcommons%252Fthumb%252Fc%252Fc8%252FSpectrophotometer_cuvettes.JPG%252F220px-Spectrophotometer_cuvettes.JPG%3Bhttp%253A%252F%252Fes.mashpedia.com%252FEspectrofot%2525C3%2525B3metro%3B220%3B293

 

 

REACTIVOS

• Hemoglobin 50x (Ferricianuro de potasio 0,60mmol/L, Cianuro de potasio 77mmol/L y dihidrogeno fosfato de potasio 2mmol/L) ; El cianuro es venenoso, su concentración es sensiblemente menor que la dosis mínima letal para el adulto, su adificación puede provocar liberación de ácido cianhídrico y el cianuro de potasio es nocivo (Xn), en contacto con ácidos libera gases muy tóxicos
• Hemoglobin Cal (Patrón de Hemoglobina 15g/dL, de origen animal)

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Para la preparación del reactivo de trabajo: para 5ml (4,9 ml de agua destilada + 2 gotas de reactivo) para 250 ml (245ml agua destilada + 1 frasco (5ml) de reactivo)
• Mezclar bien
• Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita la contaminación durante su uso
• No usar reactivos fuera de la fecha indicada
• Indicadores de deterioro de los reactivos: presencia de partículas y turbidez, absorbancia del blanco a 540nm >-0,01
• 1.- Condiciones del ensayo:
• Longitud de onda: 540nm
• Cubeta: 1cm paso de luz
• Temperatura: 15-25ºC
• 2.-Ajustar el espectrofotómetro a cero frente agua destilada
• 3.-Pipetear:
• A) Método macro
•                                               Blanco                            Patrón                          Muestra
• RT (ml)                                     5,0                                 5,0                                  5,0
• Calibrador (microlitros)                                                20
• Muestra (microlitros)                                                                                            20
• Pero nosotros hemos utilizado el método micro
• B) Método micro
•                                              Blanco                            Patrón                          Muestra
• RT (ml)                                     2,5                                 2,5                                  2,5
• Calibrador (microlitros)                                                10
• Muestra (microlitros)                                                                                            10
• 4.- Mezclar e incubar 3minutos a temperatura ambiente (15-25ºC)
• 5.- Leer la absorbancia (A) del calibrador y la muestra, frente al Blanco de reactivo
• Se habla de valores de referencia, existen diferencias entre zonas geográficas y grupos étnicos
• La base es la reacción hay que medir todo con reactivo, primero siempre el blanco para que desquite espectofotómetro
• Uso espectofómetro:
• 1 Encender (enter)
• 2 fecha (enter)
• 3 nº1 absorbancia
• 4 nº1 monocromática
• 5 nº5 (540nm enter)
• 6 nº100 vol muestra (enter)
• 7 nº0 tiempo (enter)
• 8 nº0 temperatura (enter)
• 9 blanco (pump)
• 10 patrón (pump)
• 11 muestra (pump)
• 12 agua destilada en cubeta (wash)

OBSERVACIÓN

Valores:
Hombres: 14-18 g/dL
Mujeres: 12-16 g/dL
Niños: 10-14 g/dL

Lo hemos calculado mediante:

• Con factor: (A) Muestra x 36,77 = g/dL de hemoglobina en la muestra
• Con patrón:
•          (A)Muestra / (A) Patrón x 15(Concent Patrón) = g/dL de hemoglobina en la muestra

Nuestros calculos han sido

0,238/0,136 x 15
0,143/0,136 x 15
0,069/0,136 x 7,5

Después hemos realizado el cálculo mediante la gráfica, donde cogemos 4 tubos de ensayo donde el Blanco pondríamos con pipeta 2,5 RT, patrón nº1 (7,5 concentración + 2,5 RT), patrón nº2 (3,75 concentración + 2,5 RT) éste si no está hecho cogemos 2 tubos de ensayo pequeños y echamos 10 microlitros en el primer tubo de 7,5 concentración y en el segundo tubo cogeríamos 5 microlitros de 7,5 concentración + 10 microlitros de agua destilada) y por último la muestra (2,5 RT + 10 microlitros de sangre)
Leemos nuestra absorbancia y realizamos nuestra gráfica correspodiente

PRACTICA XXVII (15/01/15)

RECUENTO DE PLAQUETAS CON HEMOCITÓMETRO

INTRODUCCIÓN

En el siguiente recuento, se diluye la sangre problema en un líquido apropiado, y se deposita en una cámara de recuento, donde se cuenta las células presentes en alguno de los cuadrados de uno de los retículos. Se utiliza sangre capilar o venosa extraída recientemente y recogida en un tubo con EDTA.

https://www.google.es/search?q=plaquetas&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=h6DjVJjDO8PXaq_dgtA

B&ved=0CAYQ_AUoAQ#tbm=isch&q=plaquetas+&imgdii=WqLYjQwbU_PcxM%3A%3B523ZB2qweOAtOM%3BWqLYjQwbU_PcxM%3A&imgrc=WqLYjQwbU_PcxM%253A%3BqGYwXq4z1VniUM%3Bhttp%253A%252F%252Fwww.escuelapedia.com%252Fwp-content%252Fuploads%252FLas-plaquetas.jpg%3Bhttp%253A%252F%252Fwww.escuelapedia.com%252Fplaquetas%252F%3B800%3B600

 

MATERIAL

• Tubo de ensayo, preferible de plástico
• Pipeta diluidora de Thoma, para recuento de glóbulos rojos
• Cámara de recuento, con retículo Neubauer mejorado
• Cubreobjetos
• Microscopio
• Placa de Petri
• Papel de filtro

 

 

https://www.google.es/search?q=observacion+hemat%C3%ADes+camara+recuento&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=BobjVIbi

N8XvasHXgYgF&ved=0CAYQ_AUoAQ#tbm=isch&q=pipeta+diluidora+de+thoma%2C+globulos+rojos&imgdii=_&imgrc=6TPmMMoFa4KvhM%253A%3Bn6LU7OeNFTS49M%3Bhttp%253A%252F%252Fhtml.rincondelvago.com%252F000759864.jpg%3Bhttp%253A%252F

%252Fhtml.rincondelvago.com%252Frecuentos-celulares.html%3B250%3B187

 

 

REACTIVOS

• Agua destilada
• Líquido de dilución

 

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Verter en un tubo de ensayo el volumen necesario de líquido de dilución, éste no ha de ser reintegrado al frasco, para evitar contaminarlo
• Con la pipeta diluidora aspirar la sangre hasta la señal de 1
• Limpiar el exterior de la pipeta con ayuda de una gasa
• Aspirar el líquido de dilución hasta la señal de 101 de la pipeta
• Agitarla durante 5 minutos
• Desechar las 5 primeras gotas
• Cargar adecuadamente la cámara de recuento
• Colocarla en el interior de una cámara húmeda, se deposita papel de filtro con agua y se desposita encima nuestra cámara de recuento
• La dejamos reposar durante 15 minutos, ésta evita el resecamiento de la dillución de sangre presente en la cámara de recuento y el reposo asegura la sedimentación completa de todas las plaquetas
• La colocamos sobre el microscopio y realizamos el contaje de plaquetas

La limpieza de la pipeta de Thoma se realiza:

Haciendo tres aspiraciones 1º en agua del grifo, 2º agua destilada y 3º en alcohol, y seguidamente la secamos con el secados preferiblemente

 

La limpieza de cámara de recuento se realiza:

Aclarando con agua tibia, después agua destilada y secamos con un paño suavee dejándolo al aire

 

 

OBSERVACIÓN

• Los trombocitos se observan como corpúsculos redondeados u ovalados, de tamaño muy pequeño y muy refrigerentes, no hay que confundirlos con leucocitos o bien, partículas de polvo
• Se calcula:
• PLT/mm3: P x V x D = P x 1000 ( P: nº plaquetas contadas en un cuadrado grande, V: correción de volumen (10), D: correción de dilución (100)
• Si la cifra obtenida es muy reducida se efectúa una dilución menor de la muestra y se cuentan los trombocitos depositados en varios cuadrados grandes
• Si es muy elevada, se efectúa una dilución mayor de la muestra
• Esto implica un ajuste de los cálculos necesarios para obtener el PLT/mm3 y tiene por objeto el confirmar los resultados obtenidos

 

https://www.google.es/search?q=observacion+hemat%C3%ADes+camara+recuento&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=BobjVIbiN

8XvasHXgYgF&ved=0CAYQ_AUoAQ#tbm=isch&q=observacion+micrococpica+plaquetas+ca

mara+de+recuento&imgdii=_&imgrc=1DtbejXUUQDqlM%253A%3B_R8Iko2P_huHGM%3Bhttp%253A%252F%252F4.bp.blogspot.com%252F-Jyjx3yzlP7Y%252FT2-15p6ruQI%252FAAAAAAAAAbc%252FLTPfTj2IJ8A%252Fs1600%252FIMG02600-20120321-0846.jpg%3Bhttp%253A%252F%252Fedurirom.blogspot.com%252F2012%252F03%252Fpractica-no-6-recuento-de-plaquetas-con.html%3B1312%3B1137

 

HOJA DE TRABAJO

 

A) ¿Qué tipo de pipeta diluidora se utiliza en el recuento de plaquetas?

Pipeta diluidora de Thoma

 

B) ¿Qué funciones desempeña el líquido de dilución empleado?

Este líquido rompe los hematíes, evita la agregación de las plaquetas entre sí y su adhesión a otros elementos, y facilita la visualización de las plaquetas al hacerlas refringentes

 

C) ¿Cuánto líquido de dilución se necesita para efectuar el ensayo?

Aproximadamente 1 ml

 

D) ¿Con qué se puede preparar una cámara húmeda?

Recortamos papel de filtro ajustándolo a una placa de Petri

 

E) ¿Con qué objetivo se cuentan las plaquetas?

Primero con el de 10x y seguidamente con 40x

 

F) ¿Cómo se aprecian los trombocitos en este recuento?

Como corpúsculos redondeados u ovalados, de tamaño muy pequeño y refringentes

PRACTICA XXVI (15/01/15)

DETECCIÓN DE CRIOGLOBULINAS

INTRODUCCIÓN

Son inmunoglobulinas aisladas o complejos inmunes que estan alterados, esta alteración hacen que se vuelvan insolubles y precipiten en el suero cuando están expuestas a una temperatura inferior a la normal del cuerpo humano.
Hay 3 tipos de crioglobulinemias
Tipo 1: trastornos proliferativos
Tipo 2: hepatopatías crónicas
Tipo 3: procesos autoinmunes
La detección de crioglobullinas se basa en la exposición del suero problema a la acción de una temperatura baja unos 4ºC, a esta temperatura las crioglobulinas precipitan más.
Si el suero problema contiene crioglobulinas, éstas precipitan con el frío, y el precipitado formado adopta el aspecto de partículas blanquecinas.
Centrifugar la muestra a 3500rpm/15min
La muestra es suero transparente, obtenido de sangre coagulada completamente a temperatura corporal, y separado del coágulo en un ambiente cálido.
Es importante evitar que la coagulación se produzca en un ambiente frío, pues esto puede dar lugar a la formación de una pequeña cantidad de crioglobulinas.


MATERIAL

• Pipeta Pasteur
• Tubo de ensayo
• Gradilla
• Nevera
• Baño de agua
• Capilar de microhematocrito no heparinizado
• Plastilina
• Centrífuga de microhematocrito
• Regla o lector de microhematocrito

 

https://www.google.es/search?q=observacion+hemat%C3%ADes+camara+recuento&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=BobjVIbiN

8XvasHXgYgF&ved=0CAYQ_AUoAQ#tbm=isch&q=suero+en+capilar+heparizado&imgdii=_

&imgrc=_HNSsXtoSy-fhM%253A%3BKMFRftdhpfcKKM%3Bhttp%253A%252F%252F4.bp.blogspot.com%252F_HZIO9Uu6NHY%252FTPqSErO9THI%252FAAAAAAAABpE%252F3Q6wxJc-2VQ%252Fs1600%252Fcapilar%252Bheparinizado.jpg%3Bhttp%253A%252F%252Fapuntesauxiliarenfermeria.blogspot.com%252F2010%252F12%252Flas-muestras-de-sangre.html%3B400%3B335

 

 

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Depositar el suero problema en un tubo de ensayo
• Colocar el tubo que contiene el suero problema en una nevera, de forma que esté a una temperatura comprendida entre los 4 y 6ºC
• Examinar el tubo a los 30 minutos y después cada día, durante 6 días
  

   

OBSERVACIÓN

 

 

 https://www.google.es/search?q=observacion+hemat%C3%ADes+camara+recuento&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=BobjVIbiN8X
vasHXgYgF&ved=0CAYQ_AUoAQ#tbm=isch&q=suero+en+tubo+de+ensayo&imgdii=yYJHsM
oyOp5_nM%3A%3BdlA0e7TLmwNs4M%3ByYJHsMoyOp5_nM%3A&imgrc=yYJHsMoyOp5_nM%253A%3BR7JlqYVIju8ovM%3Bhttp%253A%252F%252Fwww.monografias.com%252Ftrabajos81%252Fserologia-forense%252Fimage006.jpg%3Bhttp%253A%252F%252Fwww.monografias.com%252Ftrabajos81%252Fserologia-forense%252Fserologia-forense2.shtml%3B211%3B242

• Si aparecen partículas blanquecinas en el suero, éste ha de ser incubado a 37ºC. Cuando no desaparecen las partículas, tras la incubación, se considera que éstas se deben a restos de fibrina
• Cuando desaparecen, se estima que son crioglobulinas precipitadas (prueba positiva)
• Discretamente turbio: su grado de positividad es +
• Francamente turbio: su grado de positividad es ++
• Lechoso: su grado de positividad es +++
• En el caso de que la prueba sea positiva, puede realizarse una semicuantificación de las crioglobulinas presentes en el suero, mediante la determinación del criocrito
• Se mide:
• 1º llenar un capilar con el suero problema las 3/4 partes, 2º sellarlo con plastilina en el extremo por donde ha entrado el suero, 3º enfriarlo a 4-6ºC hasta que se produzca la precipitación máxima de las crioglobulinas, 4º centrifugar y por último paso calcular el porcentaje que supone la columna de precipitado, con respecto a la columna total de suero
• El criocrito es la relación existente entre el volumen ocupado por el precipitado de crioglobulinas y el ocupado por el suero total, expresado en forma de porcentaje.
• Sus manifestaciones clínicas: aumento de la viscosidad de la sangre, precipitación de las crioglobulinas y depósito de inmunocomplejos

https://www.google.es/search?q=observacion+hemat%C3%ADes+camara+recuento&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=BobjVIbiN8Xv
asHXgYgF&ved=0CAYQ_AUoAQ#tbm=isch&q=crioglobulinas&imgdii=_&imgrc=8ncQ8kXitdk
TvM%253A%3B_24qqgT1DDfcBM%3Bhttp%253A%252F%252Fwww.uv.es%252Fderma%252FCLindex%252FCLvasculitis%252Fvascri2.jpg%3Bhttp%253A%252F%252Fwww.uv.es%252Fderma%252FCLindex%252FCLvasculitis%252Fvascrio001.htm%3B1006%3B696


HOJA DE TRABAJO

A) ¿A qué temperatura se debe someter el suero en una detección de crioglobulinas?
A unos 4ºC

B) ¿Cuántas cruces se le asigna a un suero que adquiere un aspecto lechoso?
+++

C) ¿A qué concentración sérica suelen encontrarse las crioglobulinas tipo I?
Mas 5 mg/ml

D) ¿Qué manifestaciones clínicas puede producir una crioglobulinemia?
Aumento de la viscosidad de la sangre, precipitación de las crioglobulinas y depósito de inmunocomplejos

VALORACION DE LOS RESULTADOS

En el suero problema:
No hay crioglobulinas