DETERMINACIÓN SIDEREMIA (HIERRO)
INTRODUCCIÓN
El hierro se asocia del complejo sérico hierro-transferrina en medio ácido débil
Fe libre se reduce a ión ferroso mediante el ácido ascórbico
Iones ferrosos en presencia de FerroZine forma complejo coloreado
Fe constituyente de un gran nº enzimas
Inmunoglobulina contiene Fe, así como el hígado
Fe necesario para la producción de hemoglobina
Un déficit de hierro da anemia ferropénica
Los niveles elevados: hemocromatosis, cirrosis...
La variación día a día es común en poblaciones sanas
La muestra sería suero o plasma heparinizado. Libre de hemólisis. Separado lo antes posible de los hematíes. Estabilidad de la muestra: el hierro es estable de 7 días a 2-8ºC
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MATERIAL
- 4 tubos de ensayo
- 2 pipetal de 1ml
- 1 pipeta automática 200 microlitros
- Espectofotómetro
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz
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REACTIVOS
- R1 Tampón: Acetato pH 4,9 100mmol/L
- R2 Reductor: Ácido ascórbico 99,7%
- R3 Color: FerroZine 40mmol/L
- IRONCAL: Patrón primario acuoso de Hierro 100microgramos/dL
Indicadores de deterioro de los reactivos: Presencia de partículas y turbidez. Absorbancia del Blanco a 562nm >- 0,020
TÉCNICA O PROCEDIMIENTO
- 1.-Condiciones del ensayo:
- Longitud de onda: 562 nm (530-590)
- Cubeta: 1cm paso de luz
- Temperatura: 37ºC/15-25ºC
- 2.-Ajustar el espectofotómetro a cero frente a agua destilada
- 3.- Pipetear en una cubeta
- Blanco RT Patrón Blanco Muestra Muestra
- RT (ml) 1,0 1,0 1,0 1,0
- R3(gotas) 1 1 1
- Agua destilada (microlitros) 200
- Patrón (microlitros) 200
- Muestra (microlitros) 200 200
- 4.-Mezclar e incubar 5min a 37ºC o 10min a temperatura ambiente
- 5.-Leer las absorbancias del Patrón y la muestra frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30minutos
- Cálculos
- Factor de conversión:
- Valores de referencia:
Mujeres: 40-150 microgramos/dL
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia
- Resultados:
(A) Patrón 0,106
(A) Blanco Muestra 1,566
(A) Muestra 1,570
1,570-1,566/0,106x100= 0,037mg/dL
Resultado: 3,77 no válido ya que hemos cogido sangre de la bolsa y debería de ser fresca
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