PRACTICA XXIX (2201/15)

 

DETERMINACIÓN SIDEREMIA (HIERRO)

INTRODUCCIÓN

El hierro se asocia del complejo sérico hierro-transferrina en medio ácido débil
Fe libre se reduce a ión ferroso mediante el ácido ascórbico
Iones ferrosos en presencia de FerroZine forma complejo coloreado
Fe constituyente de un gran nº enzimas
Inmunoglobulina contiene Fe, así como el hígado
Fe necesario para la producción de hemoglobina
Un déficit de hierro da anemia ferropénica
Los niveles elevados: hemocromatosis, cirrosis...
La variación día a día es común en poblaciones sanas
La muestra sería suero o plasma heparinizado. Libre de hemólisis. Separado lo antes posible de los hematíes. Estabilidad de la muestra: el hierro es estable de 7 días a 2-8ºC

https://www.google.es/search?q=determinacion+de+hemoglobina&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=r
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MATERIAL

• 4 tubos de ensayo
• 2 pipetal de 1ml
• 1 pipeta automática 200 microlitros
• Espectofotómetro
• Cubetas de 1,0 cm de paso de luz

https://www.google.es/search?q=determinacion+de+hemoglobina&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=rLz

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REACTIVOS

• R1 Tampón: Acetato pH 4,9                   100mmol/L
• R2 Reductor: Ácido ascórbico                  99,7%
• R3 Color: FerroZine                                  40mmol/L
• IRONCAL: Patrón primario acuoso de Hierro                   100microgramos/dL

Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos: Presencia de partículas y turbidez. Absorbancia del Blanco a 562nm >- 0,020

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• 1.-Condiciones del ensayo:
• Longitud de onda: 562 nm (530-590)
• Cubeta: 1cm paso de luz
• Temperatura: 37ºC/15-25ºC
• 2.-Ajustar el espectofotómetro a cero frente a agua destilada
• 3.- Pipetear en una cubeta
•                                        Blanco RT           Patrón             Blanco Muestra          Muestra
• RT (ml)                              1,0                     1,0                       1,0                          1,0
• R3(gotas)                             1                        1                                                         1
• Agua destilada (microlitros) 200
• Patrón (microlitros)                                      200
• Muestra (microlitros)                                                                200                          200
• 4.-Mezclar e incubar 5min a 37ºC o 10min a temperatura ambiente
• 5.-Leer las absorbancias del Patrón y la muestra frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30minutos

OBSERVACIÓN

• Cálculos

(A) Muestra - (A) Blanco de Muestra/ (A) Patrón x 100 (Conc Patrón) = microgramos/dL hierro

• Factor de conversión:

microgramos/dL x 0,179 =mmol/L

• Valores de referencia:

Hombres: 65-175 microgramos/dL
Mujeres: 40-150 microgramos/dL
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia

• Resultados:

(A) Blanco 0,051
(A) Patrón 0,106
(A) Blanco Muestra 1,566
(A) Muestra 1,570

1,570-1,566/0,106x100= 0,037mg/dL
Resultado: 3,77 no válido ya que hemos cogido sangre de la bolsa y debería de ser fresca