PRACTICA L (20/05/15)

DETERMINACIÓN DE UN Du

INTRODUCCIÓN

Los anticuerpos tipo IgG son incapaces de producir la aglutinación de los hematíes por sí solos, son capaces de adherirse a sus superficie tanto in vivo como in vitro y decimos que han sensibilizado a los hematíes, capaces de fijar el complemento , sin llegar a producir hemólisis de los eritrocitos
Estos anticuerpos tipo IgG pueden reaccionar con un suero de conejo en el que existen anticuerpos antiglobulina humana del tipo IgM
Resultado: aglutinación de los hematíes
Este suero es lo que llamamos: suero de Coombs, puede ser de dos tipos:
Poliespecífico: si está dirigido contra la IgG y contra el componente C3d del complemento
Monoespecífico: contra la IgG o contra algún componente

La prueba de Coombs puede realizarse de dos modos:
Prueba directa: detectar anticuerpos incompletos que han sensibilizado a los hematíes in vivo, para ello lo enfrentamos al suero de Coombs y observamos si existe o no aglutinación
Prueba indirecta: donde el paso previo es la sensibilización de los eritrocitos in vitro para hacerlos reaccionar con el suero de Coombs, en este caso buscamos anticuerpos incompletos libres en l suero, o poner de manifiesto la presencia de antígenos débiles en la membrana de los hematíes
El Du es un antígeno D débil, por ello debemos sensibilizar los hematíes problema con un suero que contiee anticuerpos anti-D para enfrentarlos al suero de Coombs. Si existe el antígeno Du en la superficie de los eritrocitos se producirá la unión de anticuerpos anti-D a sus receptores de membrana, y en la segunda fase darán aglutinación en presencia del suero antiglobulina humana
Esta es una prueba de Coombs indirecta
Muestra: hematíes suspendidos al 5%

MATERIAL

• Tubos de centrífuga
• Centrífuga
• Pipetas Pasteur
• Gradilla
• Baño de agua
• Reloj

REACTIVOS

• Suero anti-D humano
• Suero antiglobulina humana de conejo (suero de Coombs)
• Solución salina fisiológica

Imagen realizada en el Laboratorio

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• En un tubo echar una gota de suero anti-D y una gota de suspensión de hematíes al 5%

Imagen realizada en el Laboratorio

• Mezclar
• Incubar a 37ºC durante 30-45 minutos

Imagen realizada en el Laboratorio

• Lavar los hematíes en solución salina fisiológica tres veces
• Decantar completamente la solución salina después del último lavado
• Añadir sobre el sedimento una gota de suero de Coombs
• Mezclar suavemente
• Centrifugar a 1000 rpm durante 1 minuto

OBSERVACIÓN

• Golpeamos para observar la aglutinación
• Si existe, el Rh es positivo (en la membrana tienen el antígeno Du y se clasifica como Rh positivo variante de Du), y si no existe se clasifica como Rh negativo
• Para evitar falsos positivos debido a una sensibilización previa de los hematíes in vivo, debemos realizar una prueba de Coombs directa con los hematíes problema, esto nos servirá como control negativo

HOJA DE TRABAJO

A) ¿Qué contiene el suero de Coombs?
Anticuerpos anti-D

B) ¿Qué se detecta con la prueba directa?
Falsos positivos

C) ¿Qué podemos detectar con la prueba indirecta?
Anticuerpos incompletos libres en suero o presencia de antígenos débiles en membrana de hematíes

D) ¿Qué buscamos en la sangre del paciente?
Antígeno Du

E) ¿Qué ocurre si el control es positivo?
Hay antígeno Du

Valoración de los resultados

La sangre es: Rh positivo