PRACTICA XLV (27/04/15)

 

DETERMINACIÓN SÉRICA DEL GRUPO ABO

INTRODUCCIÓN

El suero de un individuo debe contener anticuerpos frente a los antígenos que no están presentes en sus propios hematíes. Por ello, al reaccionar este suero con hematíes conocidos del grupo A y del grupo B, sólo producirá aglutinación en el caso de ser enfrentados a eritrocitos con antígenos distintos a los de sus propios hematíes
Esta técnica puede realizarse tanto en porta como en tubo, aunque se prefiere en tubo
En el caso de que no se disponga de suero para realizar esta prueba, se recomienda que otro técnico compruebe el resultado de la determinación celular
Muestra: suero obtenido mediante coagulación de la sangre en baño de agua a 37ºC durante 20 o 30 minutos, posteriormente centrifugamos durante 10 minutos a 3000 rpm y extraemos el sobrenadante

MATERIAL

• Tubos de centrífuga
• Centrífuga
• Gradilla
• Pipeta Pasteur
• Baño de agua
• Reloj
• Rotulador

REACTIVOS

• Hematíes del grupo A1
• Hematíes del grupo A2
• Hematíes del grupo B
• Hematíes del grupo 0
• Hematíes de la sangre problema

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Para evitar falsos negativos por la presencia de complemento activo en el suero, comenzamos inactivando la muestra, se realiza manteniendo el suero en un baño de agua a 56ºC durante 10 minutos, así evitamos los fenómenos de hemólisis debidos al complemento

Imagen realizada en el Laboratorio

• Suspensión de hematíes al 5%, el día de la práctica en clase los teníamos al 2% y no se obtuvieron resultados ya que estaban demasiados lavados y tendrían que estar al 5%, la cual también la realizamos
• Rotulamos un tubo con la letra A1, otro con la letra A2, otro B, otro 0, y otro C
• Añadimos a cada tubo dos gotas del suero problema inactivado
• Depositamos una gota de la suspensiónn de hematíes que se corresponda con la letra del tubo rotuladoo. En el tubo C añadimos una gota de la suspensión de los hematíes propios de la sangre problema,ya que nos servirá de control negativo
• Agitamos y centrifugamos 1000 rpm durante 1 minuto

OBSERVACIÓN

• Golpeamos para desprender el sedimento
• Si aparecen grumos rojos flotando en un líquido claro indica aglutinación en el caso contrario se resuspenden homogéneamente dando lugar a un líquido de color rojizo

Tubo A1 Tubo A2 Tubo B Tubo 0  Tubo C  Ac presentes en el suero Grupo eritrocitario
     -               -                +            -              -                Anti-B                                    A1
   - o +           -                +           -               -             Anti-B y anti-A1                       A2
     +              +               -            -               -                Anti-A                                     B
     +             +               +            -               -             Anti-A y anti-B                          0
     -              -                -            -               -                 Ninguno                               A1B
   -o +           -                -            -               -               Ninguno o Anti-A1                A2B
     +             +               +           +              +             Autoanticuerpos                   Ininterpretable

• Es difícil confirmar el grupo sanguíneo por esta técnica en el caso de los recién nacidos ya que sus anticuerpos no están bien desarrollados, también encontramos dificultados en los pacientes con agammaglobulinemia ya que carecen de anticuerpos y en aquellos que poseen otros anticuerpos específicos o inespecíficos capaces di reaccionar con los antígenos del grupo ABO

Discrepancias entre la prueba celular y la sérica

• (En el caso de no obtener el mismo resultado)
• Repetir ambas pruebas
• Si persiste la discrepancia se obtiene una nueva muestra de sangre y se realizan hematíes lavados y resuspendidos
• Efectuar una prueba de Coombs directo sobre los hematíes para detectar posibles autoanticuerpos
• Realizar la prueba sérica utilizando un panel de screening con hematíes A1, A2, B, 0

Causas de las discrepacias

Errores técnicos:

• Indentificación incorrecta de las muestras
• No añadir suficiente reactivo y muestra
• Contaminación de los reactivos o hematíes del panel de screeaning
• Proporción inadecuada de muestra y reactivos
• Sobrecentrifugación o centrifugación insuficiente
• No valorar la hemólisis considerándola como aglutinación negativa

Problemas con la muestra:

• Presencia de autoanticuerpos
• Antígenos A o B débiles, congénitos o adquiridos
• Especificidad B adquirida en pacientes A1 por una infección bacteriana
• Inmunodeficiencias congénitas o adquiridas
• Fenómenos de Rouleaux

HOJA DE TRABAJO

A) ¿Qué son los hematíes tipados?
Lavados, se utiliza para pruebas con suero

B) ¿A qué dilución empleamos los hematíes del paciente?
Solución salina isotónica

C) ¿Qué clase de muestra se emplea en esta técnica?
Suero

D) ¿Qué ocurre cuando el tubo C presenta aglutinación?
Cuando son enfrentados a eritrocitos con antígenos distintos a los de sus propios hematíes

Imágenes realizadas en el Laboratorio

Valoración de los resultados

Suero 1
A1  NO
A2  SI
B    NO
0     NO
Grupo eritrocitario: A1

Suero 2
A1 NO
A2 SI
B   NO
0    NO
Grupo eritrocitario: B

Suero 3
A1 NO
A2 SI
B  NO
0   NO
Grupo eritrocitario: A2

Suero 4
A1 NO
A2 NO
B   NO
0    NO
Grupo eritrocitario: A2