PRACTICA XLIII (23/04/15)

 

DETERMINACIÓN CELULAR EN TUBO

INTRODUCCIÓN

Los hematíes problema contienen sustancias antigénicas del sistema ABO y se enfrentan a sueros conocidos que poseen anticuerpos frente a esos antígenos
Resultado final es la presencia o no de aglutinación en los hematíes reaccionantes
Muestra: sangre total anticoagulada, aunque es preferible usar una suspensión de los hematíes problema

MATERIAL

• Tubos de centrífuga
• Rotulador
• Pipetas Pasteur
• Centrífuga
• Gradillas

REACTIVOS

• Suero anti-A
• Suero anti-B
• Suero anti-AB
• Solución salina fisiológica

 

Imagen realizada en el Laboratorio

 

 

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Coger la muestra de los hematíes lavados al 2%
• Rotular los 3 tubos de ensayo con las letras A, B y AB
• Añadir a cada tubo una gota de suspensión de hematíes al 2%
• Añadir dos gotas de suero anti-A en el tubo A, dos gotas de anti-B en el tubo B y dos gotas de anti-AB en el tubo AB
• Centrifugar 1000 rpm durante 1 minuto

 

Imagen realizada en el Laboratorio


OBSERVACIÓN

• Golpeamos para desprender el sedimento y observamos la presencia o ausencia de aglutinación
• Reacción negativa: los hematíes se resuspenden homogéneamente
• Reacción positiva: se observa un botón de hematíes que permanece unidos una vez desprendido el sedimento
• Se realiza igual que la técnica en porta
• Los restos de detergente o sustancias extrañas pueden ocasionar falsos negativos
• Falsos positivos:
• Aglutinación no específica: presencia de ácido hialurónico en la sangre
• Fenómeno de Rouleaux: imagen de pilas de moneda, las sustancias que pueden originar este fenómeno son el fibrinógeno, el dextrano
• Estos fenómenos se evitan con: lavado previo de los hematíes problema

Imagen realizada en el Laboratorio

 

 

HOJA DE TRABAJO

 

A) ¿Qué tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis?

Aglutinación

 

B) ¿A qué concentración se prepara la suspensión de hematíes problema?

Al 2%

 

C) ¿Cómo se ve una aglutinación positiva?

Se ve enn precipitado, en grumos

 

D) ¿A qué se debe el fenómeno de Rouleaux?

Al no realizar el lavado previo de hematíes

 

E) ¿Cómo se pueden evitar los falsos positivos?

Realizando un lavado previo de hematíes

 

Valoración de los resultados

 

La sangre ensayada es del grupo eritrocitario: 0

PRACTICA XLII (22/04/15)

DETERMINACIÓN CELULAR EN PORTA

INTRODUCCIÓN

La detección celular del grupo ABO puede realizarse mediante una técnica en porta o en tubo. Los hematíes problema, contienen sustancias antigénicas del sistema ABO, se enfrentan con antisueros (aglutininas) dirigidos contra esos antígenos
Resultado final: aglutinación directa cuando reaccionan contra el antisuero
Para estudios in vitro se utilizan anticuerpos anti-A, anti-B y anti-AB. Sin embargo, como aglutininas anti-A1 o anti-H se utilizan lectinas (proteínas presentes en algunas plantas capaces de aglutinar a los hematíes humanos)
Es importante mencionar que todas estas determinaciones deben hacerse a temperatura ambiente, ya que la aplicación del calor puede afectar a los hematíes impidiendo observar una posible aglutinación
En resumen, consiste en observar la aglutinación de los hematíes enfrentados a una serie de antisueros conocidos y de reconocida eficacia, para determinar el grupo ABO del individuo
Muestra: sangre capilar o sangre total anticoagulada



 

 

http://neetcurioso.com/wp-content/uploads/2013/08/gota-de-sangre.jpg

 

 

MATERIAL

• Portaobjetos
• Rotulador
• Pipeta Pasteur
• Palillos
• Reloj

REACTIVOS

• Suero anti-A

Imagen realizada en el Laboratorio

• Suero anti-B

Imagen realizada en el Laboratorio

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Dividimos el portaobjetos en 2 secciones una marcamos con la letra A y otra la letra B
• Depositar una gota de suero anti-A y suero anti-B en cada parte correspondiente
• Situamos una gota de sangre junto a la gota de cada antisuero
• Mezclamos las gotas con un palillo y formando un círculo de 2 a 2,5 cm de diámetro
• Hacemos oscilar suavemente el portaobjetos hacia delante y hacia detrás durante dos minutos
• Observamos la presencia o ausencia de aglutinación

Imagen realizada en el Laboratorio: donde ha aglutinado en la sección B por tanto, es grupo B

 

 

OBSERVACIÓN

 

• Aglutinación: grumos rojos que flotan en un líquido claro, en el caso contrario los hematíes permanecen en forma de suspensión homogénea de color rojizo
• Estas pruebas son muy eficaces ya que la presencia de plasma en la muestra aumenta la velocidad de la reacción y el tamaño de los grumos
• El resultado puede observarse en unos segundos, aunque conviene reexaminar la reacción del anti-A al cabo de 2 minutos para comprobar que no se ha pasado por alto ninguna reacción débil

 

Hematíes y suero anti-A       Hematíes y suero anti-B     Grupo eritrocitario

 

               +                                              -                                          A

               -                                              +                                          B

              +                                             +                                         AB

               -                                              -                                           0

 

HOJA DE TRABAJO

 

A) ¿Qué tipo de técnica inmunológic se emplea en este análisis?

Aglutinación

 

B) ¿Qué muestra utilizamos?

Sangre capilar o sangre anticoagulada

 

C) ¿Cómo se ve la aglutinación positiva?

Grumos rojos que flotan en un líquido claro

 

D) ¿Qué debemos hacer si el grupo obtenido es A?

Los hematíes problema deberán de ser ensayados de nuevo con lectina anti-a1, si produce aglutinación, el sujeto pertenerá al subgrupo A1

 

Valoración de los resultados

 

La sangre analizada es del grupo eritrocitario:

 

 

Imagen realizada en el Laboratorio, donde tenemos a una persona del grupo A, otra del grupo B y otra del grupo 0
 

Gráfica de la clase de 1º de Laboratorio de Diagnóstico Clínico

 



PRACTICA XXXVII (4/03/15)

DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPA)

 

INTRODUCCIÓN

Tiempo que tarda en coagular un PPP, tras su recalcificación y en presencia de un sustituto de f3p
La recalcificación se realiza mediante la adición de una solución de cloruro cálcico (CaCl2), el sustituto consiste en una suspensión de fosfolípidos, obtenida a partir de cerebros de conejos (cefalina)
Factores de contacto se pueden utilizar varias sustancias: caolín, polvo de vidrio, sílice, celite y ácido elágico
Muestra: plasma pobre en plaquetas (PPP)


MATERIAL

• Gradilla
• 2 cubetas de coagulómetro
• 2 trocitos de acero
• Pipeta automática (100 microlitros)
• Puntas de pipeta amarillas
• Coagulómetro

• Baño de agua 37ºC
• 4 tubos de ensayo de plástico

REACTIVOS

• Solución cloruro cálcico 0,025 M
• Cefalina activada con ácido elágico
• Pool de plasmas normales o un plasma control normal

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Homogeneizar reactivos y muestra, sin agitarlos bruscamente
• Depositar volumen necesario
• Atemperar: 37ºC durante 5 a 15 minutos
• Introducir trocito de acero en cada una de las cubetas
• Tubo con letra M (muestra) y otro con letra C (control)
• Verter  100 microlitros de muestra : cubeta M
• Verter 100 microlitros de plasma control normal : cubeta C
• Añadir 100 microlitros de cefalina activada
• Mezclarlo bien
• Incubar a 37ºC durante 2 minutos, placa calefactora
• Colocarla y agregar 100 microlitros de CaCl2 0,025 M
• Al agregarlo se pone en marcha el magnetoagitador del coagulómetro y comieza su lectura
• Cuando se forma el coágulo finaliza la lectura y nos ofrece en su pantalla el tiempo transcurrido desde la adición de CaCl2

OBSERVACIÓN

• TTPA: adición CaCl2 hasta la formación coágulo de fibrina
• Lo más correcto es determinar 2 veces y hacer su media correspondiente
• Nomrla: 30 y 40 segundos, tiempo superior se considera alargado, y también es anormal un TTPA de la muestra superior, en más de 8 segundos, al del control
• Se emplea para detectar déficits de la vía intrínseca, para el control de los tratamientos con anticoagulantes y terapias con heparina

 
 
https://www.google.es/search?q=cefalina&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=w2sFVZbjN4LuUv
W2g-gL&ved=0CAYQ_AUoAQ#tbm=isch&q=erase+una+vez+coagulacion&imgdii=_&imgrc
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HOJA DE TRABAJO

A) ¿De dónde se obtiene el sustituto de f3p?
A partir de cerebros de conejos

B) ¿Cómo se llama el sustituto de f3p?
Cefalina

C) ¿Qué activadores de los factores de contacto se pueden utilizar?
Caolín, polvo de vidrio, sílice, celite y ácido elágico

D) ¿Cuántos segundos debe superar el TTPA de la muestra al del control para ser considerado anormal?
8 segundos

Tiempo de coagulación (2/03/15)

INTRODUCCIÓN

Es el tiempo que tarda en generarse un coágulo en una muestra de sangre no anticoagulada, que se pone en contacto con una superficie de vidrio
Muestra de sangre en fresco

MATERIAL

• Lancetas
• Gasas
• Capilar (azul)
• Baño maria a 37ºC

REACTIVOS

• Alcohol

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Desinfectar bien la punta del dedo
• Pinchar con lanceta
• LLenar 1/3 del capilar azul
• Se sitúa la muestra en el baño maría a 37ºC
• Moverlo dentro de éste hasta que coagule y mirar el tiempo transcurrido

OBSERVACIÓN

• El tiempo de coagulación depende de numerosas variables (el volumen de la muestra que analiza y la superficie del tubo que entra en contacto con la sangre) para su determinación reproductible, la técnica empleada ha de estar perfectamente estandarizada
• Valores normales: 5 a 10 minutos
• Este estudio permite la detección de trastornos relacionados con la vía intrínseca con la vía común de la coagulación
• Alarmiento en: déficits de factores de la vía intrínseca (hemofilia), situaciones de afibrinogenemia y fibrinolisis excesiva, terapias con heparina, esta prueba puede utilizarse en el control de los tratamientos heparínicos
• Esta prueba es poco sensible, ya que no detecta déficits ligeros de factores, por lo que está en desuso

(Nota: el día 2 falté, y no la he realizado en laboratorio, por lo que no tengo ni fotografías ni el tiempo realizado, me enteré el último día que esta práctica estaba realizada por lo que la pongo la útlima ya que todas las otras están subidas)

Curva fibrinógeno (práctica XL)

Curva actividad protrombina (práctica XXXIX)

Curva electroforesis (práctica XXXI)