PRACTICA XXXVII (4/03/15)

DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPA)

 

INTRODUCCIÓN

Tiempo que tarda en coagular un PPP, tras su recalcificación y en presencia de un sustituto de f3p
La recalcificación se realiza mediante la adición de una solución de cloruro cálcico (CaCl2), el sustituto consiste en una suspensión de fosfolípidos, obtenida a partir de cerebros de conejos (cefalina)
Factores de contacto se pueden utilizar varias sustancias: caolín, polvo de vidrio, sílice, celite y ácido elágico
Muestra: plasma pobre en plaquetas (PPP)


MATERIAL

• Gradilla
• 2 cubetas de coagulómetro
• 2 trocitos de acero
• Pipeta automática (100 microlitros)
• Puntas de pipeta amarillas
• Coagulómetro

• Baño de agua 37ºC
• 4 tubos de ensayo de plástico

REACTIVOS

• Solución cloruro cálcico 0,025 M
• Cefalina activada con ácido elágico
• Pool de plasmas normales o un plasma control normal

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Homogeneizar reactivos y muestra, sin agitarlos bruscamente
• Depositar volumen necesario
• Atemperar: 37ºC durante 5 a 15 minutos
• Introducir trocito de acero en cada una de las cubetas
• Tubo con letra M (muestra) y otro con letra C (control)
• Verter  100 microlitros de muestra : cubeta M
• Verter 100 microlitros de plasma control normal : cubeta C
• Añadir 100 microlitros de cefalina activada
• Mezclarlo bien
• Incubar a 37ºC durante 2 minutos, placa calefactora
• Colocarla y agregar 100 microlitros de CaCl2 0,025 M
• Al agregarlo se pone en marcha el magnetoagitador del coagulómetro y comieza su lectura
• Cuando se forma el coágulo finaliza la lectura y nos ofrece en su pantalla el tiempo transcurrido desde la adición de CaCl2

OBSERVACIÓN

• TTPA: adición CaCl2 hasta la formación coágulo de fibrina
• Lo más correcto es determinar 2 veces y hacer su media correspondiente
• Nomrla: 30 y 40 segundos, tiempo superior se considera alargado, y también es anormal un TTPA de la muestra superior, en más de 8 segundos, al del control
• Se emplea para detectar déficits de la vía intrínseca, para el control de los tratamientos con anticoagulantes y terapias con heparina

 
 
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HOJA DE TRABAJO

A) ¿De dónde se obtiene el sustituto de f3p?
A partir de cerebros de conejos

B) ¿Cómo se llama el sustituto de f3p?
Cefalina

C) ¿Qué activadores de los factores de contacto se pueden utilizar?
Caolín, polvo de vidrio, sílice, celite y ácido elágico

D) ¿Cuántos segundos debe superar el TTPA de la muestra al del control para ser considerado anormal?
8 segundos