PRACTICA XLI (9/03/15)

 

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FIBRINÓGENO

 

INTRODUCCIÓN

El fibrinógeno en presencia de exceso de trombina se transforma en fibrina
El tiempo de formación del coágulo es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno presente en el plasma
La determinación de fibrinógeno por el tiempo de coagulación de trombina, está basada en el método descrito por Clauss
En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la fomación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno
Factor I (fibrinógeno) proteína sintetizada en el hígado, componente de la sangre utilizado para formar el coágulo
Su determinación nos ayuda a evaluar las alteraciones en los mecanismos de coagulación
Se incrementa en inflamaciones agudas y embarazo
Valores bajos en terapias trombolíticas, enfermedades hepáticas, disfrinogenia congénita, DIC y pancrealitis
La muestra es plasma obtenido por punción venosa diluido 1/10 en solución citrato trisódico 3,8%
Mezclar la sangre con el anticoagulante
Centrifugar la muestra a 3000 rpm/10min


MATERIAL

• Coagulómetro

Imagen realizada en Laboratorio

• Baño a 37ºC
• Equipamiento habitual de laboratorio

REACTIVOS

• R1 (reconstituir con 2ml de agua destilada), R2(agitar antes de su uso) y R3 (listo para su uso)

Imagenes realizadas en Laboratorio

TECNICA O PROCEDIMIENTO

• Preparar dilución 1/10: 50 microlitros muestra + 450 microlitros de R2 (tampón imidazol)

                  TUBO 1             T2             T3            T4            T5

Dilución
Calibrador     1/40               1/30          1/20         1/10        1/5

R2 (ml)           3,9                 2,9            1,9           0,9         0,4

COAGU
LATION         0,1                0,1             0,1          0,1         0,1
CAL
(ml)

• A 0,2 ml de cada dilución añadir 20 microlitros de R3
• Atemperar a 37ºC durante 4-6minutos
• Añadir 0,1 ml de R1 (pone fibrinógeno) y cronometrar la formación de coágulos
• No atemperar la trombina R1

 

 

 

 

Imagenes realizada en Laboratorio


OBSERVACIÓN

• Calcular la media de los duplicados de los tiempos de coagulación, despues de finalizar la reacción. Utilizar los cinco puntos del calibrados para crear una curva de los tiempos obtenidos en segundos, frente a los valores de concentración de fibrinógeno de cada dilución del caloibrador (mg/dl)
• Trazar la mejor curva, examinarla y omitir los puntos no lineales, la curva final debe constar de tres puntos consecutivos como míimo. La creación de la curva solo con los puntos mas lineales producirá la mejor recuperación en los controles y las muestras de paciente
• La siguiente curva de calibración es sólo orientativa, variando en función del lote y concentración del calibrador, así como del instrumento utilizado
• La dilución 1/10 del plasma representa el 100% del valor asignado
• Valores orientativos: 200-400 mg/dl (2-4 g/L)

RESULTADOS OBTENIDOS

DILUCION           CONCENTRACIÓN (mg/dl)             TIEMPO
    
      1/5                                478                                      11,7 (ratio 0,42)
      1/10                              239                                      15,6 (ratio 0,56)
      1/20                             119,5
      1/30                             78,87
      1/40                             59,75                                   46,9 (ratio 1,67)
   Muestra                           42,3                                             (ratio 1,51)

(Nota: las diluciones que no tienen indicadas su tiempo, es porque el día de la práctica realizada el coagulómetro daba valores muy altos; 200... y no lo anotamos)

Imagen de la curva correspondiente a fibrinógeno en papel (no se aprecia pero he realizado varias fotos y al subirlas se cambia y se aprecia así, está bien realizada en papel)