PRUEBA DE MEZCLA CON PLASMA NORMAL
INTRODUCCIÓN
Se realizan cuando tiempos determinados en el plasma problema (TTPA) está alargado
Se mezclan a partes iguales el plasma problema y plasma que se sabe que es normal, y se incuba 37ºC durante 60 minutos
Si los tiempos determinados en la mezcla se corrigen, falta algún factor en el plasma problema y su carencia ha sido compensada con el aporte suplementario de factoes contenidos en el plasma o en suero normales
La prueba de mezcla se practica con plasma normal, cuando en el plasma problema se determina un TP normal y un TTPA alargado, aquí se supone que el paciente sufre un déficit de algún factor de la vía intrínseca y de los factores VIII, IX, XI o XII
Se mezlca a partes iguales el PPP problema con PPP normal, y se repite la determinación del TTPA, pero no en el PPP problema puro, sino en la mezcla preparada, tras lo cual, se incuba la mezca a 37ºC durante 60 mintuos
Si el TTPA en la mezcla se corrige, falta en el plasma problema alguno de los factores de la vía intrínseca que sin embargo, sí está presente en el PPP normal
Si el TTPA de la mezcla no se corrige con respecto al del PPP problema puro, el trastorno coagulatorio se debe a otros motivos como actuación d esustancias inhibidoras de la coagulación
Muestra: plasma pobre en plaquetas (PPP) y un TTPA anómalo, es decir, alargado
A partir del PPP anómalo hay que preparar una dilución 1/2 con el pool de plasmas normales o con el plasma contro normal
PPP ANÓMALO: 100 microlitros
Pool de plasmas normales o plasma control normal: 100 microlitros
Dilución: 1/2
Dilución incubar 37ºC durante 60 minutos
MATERIAL
- Gradilla
- 2 cubetas coagulómetro
- Coagulómetro
- Pipeta 100 microlitros
- 4 puntas de pipeta
- Baño de agua 37ºC
- 3 tubos de ensayo de plástico
REACTIVOS
- Solución de cloruro cálcico 0,025 M
- Cefalina activada con ácido elágico
- Pool de plasmas normales o un plasma control normal
TECNICA O PROCEDIMIENTO
- Homogeneizarlos
- Depositar el volumen necesitado en 3 tubos de ensayo de plástico
- Atemperar los reactivos a 37ºC durante 5 a 15 minutos
- 2 cubetas de coagulómetro e introducir sus trozitos de acero
- Roturarlas con M1 y M2
- Verter 100 microlitros de la dilución de la muestra en cada cubeta
- Añadir 100 microlitros de cefalina activada
- Mezclarla bien mediante la pipeta automática
- Incubarla 37ºC durante 2min (coagulómetro)
- Colocarlas e introducir 100 microlitros de CaCl2 0,0025 M
- Al agregarla comienza la lectura y cuando se forma el coágulo nos ofrece el tiempo transcurrido en la pantalla
OBSERVACIÓN
- Valores normales: 30 y 40 segundos
- Un tiempo superior se considera alargado
- Como el TTPA de la dilución de la muestra se determina dos veces, se calcula la cifra media de esta pareja d valores, este valor medio es el resultado final de la determinación
- TP normal y TTPA alargado: trastorno vía intrínseca
- En este caso se incuba la mezcla de plasma y cefalina activada durante 15 mintuos, si con este cambio se corrige el alargamiento del TTPA, se torna normal y hay un déficit de PK
- SI tras aumentar el tiempo de incubación, no se corrige, tiene que hacerse una prueba de mezcla con plasma normal
- Si tras la mezcla con plasma normal se corrige, deja de estar alargado, es porque falta algún factor de la vía intrínseca (VIII, IX,, XI XII) en la muestra y su carencia ha sido compensada con el aporte suplementario de factores contenidos en el plasma normal
- Si, tras la mezca con plasma normal, no se corrige el TTPA, se debe investigar la presencia en el plasma de un inhibidor de la coagulación (heparina, PDF, inhibidor tipo lupus,etc )
HOJA DE TRABAJO
A) ¿Cuándo debe hacerse una prueba de mezcla con plasma normal?
Cuando aumenta el TTPA tras ser incubado y no se corrige
B) Si tras la mezcla con plasma normal, no se corrige el TTPA, ¿qué se debe investiar?
Presencia en el plasma de un inhibidor de la coagulación
RESULTADOS OBTENIDOS
Hemos utilizado el plasma control de un compañero tras su extracción de sangre venosa
Resultados: tiempo 20,7 y ratio 0,74
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