PRACTICA XL (6/03/15)

PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE ACTIVIDAD DE LA PROTROMBINA

 

INTRODUCCIÓN

Los resultados de una determinación del tiempo de protrombina (TP) pueden expresarse en % de actividad (Indice de Quick)
Para ello es necesario preparar una curva de actividad de protrombina e interpolar en la gráfica trazada el valor en segundos del TP en el plasma problema
Se prepara una batería de diluciones a partir de un plasma contro normal y se mide el TP del plasma control normal no diluido y de cada una de las diluciones, se asigna el 100% de actividad al número de segundos medidos en la determinación del TP del plasma control normal puro, y se calcula el % que les corresponde a los valores de TP determinados en cada una de las diluciones
Con todos estos datos se traza una curva de calibrado anotando en el eje vertical los valores en segundos del TP del plasma control no diluido y de cada una de sus diluciones y en el eje horizontal el % de actividad asignado a cada uno de ellos

MATERIAL

• 8 tubos de ensayo de plástico
• Prepipeta
• Pipeta graduada de vidrio de 1ml (1000 microlitros)
• Pipeta para 100 y 200 microlitros mas 7 puntas de pipeta (amarillas)
• 5 cubetas  coagulómetro
• 5 trocitos de acero
• Coagulómetro
• Baño de agua a 37ºC
• Hoja milimetrada, regla, boli
• Gradilla

REACTIVOS

• Solución salina al 0,85% ( Dietil-barbiturato de sodio 2,94g, acetato de sodio 1,94g, y agua destilada 100ml)
• Tromboplastina cálcica
• Pool de plasmas normales o plasma control normal

TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• Homogeneizar la tromboplastina cálcica y las diluciones del plasma sin agitarlas bruscamente
• Depositar el volumen total de tromboplastina cálcica en un tubo de ensayo de plástico

                          TUBO 1          T 2        T 3            T 4             T5

Pool de plasmas     200             200        200           200             200
o plasma contro
(microlitros)

Solución salina
al 0,85%
(microlitros)           0                200         400           600             1800

Dilución               1/1               1/2          1/3            1/4               1/10

% de actividad     100              50            33             25                  10

• Atemperar la tromboplastina cálcica a 37ºC entre 5 o 15minutos
• Introducir acero
• Rotular los tubos con sus correspondientes diluciones
• Verter 100 microlitro de plasma puro y de cada una de sus diluciones en el interior de las cubetas en el % de actividad que les corresponde
• Incubar el plasma, contenido en cada cubeta, a 37ºC entre 3 y 5 minutos, pueden depositarse en la placa calefactora del coagulómetro
• Colocar cada una de las 5 cubetas en la celda de medida del coagulómetro y agregar 200 microlitros de tromboplastina cálcica, al agregarla se pone en marcha el magnetoagitador del coagulómetro y comienza su lectura
• Cuando se forma el coágulo, el coagulometro sinaliza la lectura y nos ofrece en su pantalla el tiempo transcurrido desde la adición de la tromboplastina cálcica

OBSERVACIÓN

• Lo más correcto es determinar 3 veces el TP del plasma control puro y de cada una de sus diluciones y dar como resultado final, la cifra media calculada a partir de cada trío de valores

HOJA DE TRABAJO

A) ¿Con qué se diluye el pool de plasmas normales o el plasma control normal?
Agua destilada

B) ¿Qué % de actividad se asigna a la dilución del plasma control de 1/2?
50%

C) ¿Cuándo se pone en marcha la lectura del coagulómetro?
Cuando se agrega el RT

D) ¿Qué se anota en el eje de ordenadas?
Los valores en segundos de TP del plasma control no diluido y de cada una de sus diluciones

RESULTADOS OBTENIDOS

1/1 = 5,4
1/2 = 32,2
1/3 = 45
1/4 = 49,4
1/10 = 101,9