PRÁCTICA XXXIII (27/02/15)

 

PRUEBA DE LA SACAROSA

INTRODUCCIÓN

Situar los hematíes problema en un medio de baja fuerza iónica (solución sacarosa), los eritrocitos tienden a fijar el complemento, por lo que los glóbulos rojos presentes en la muestra tienen una sensibilidad anormalmente alta al complemento tienden a sufrir la acción de éste, y a lisarse
Muestra sangre venosa completa y anticoagulada con EDTA, por ejemplo
Hemos cogidos dos muestras diferentes, sangre control y sangre problema

MATERIAL

• Pipetas pasteur
• Pipetas graduadas ( 1 de 5ml, 2 de 2 ml, 3 de 0,5ml)
• Pipeta automática (100 microlitros) para hacer 0,1 ml
• 6 tubos de centrífuga
• Reloj
• Centrífuga
• Espectrofotómetro
• Cubetas de espectrofotómetro
• Gradilla

REACTIVOS

• Solución acuosa de sacarosa (azúcar) a una concentración del 9,24%
• Sangre control (extraída recientemente)
• Solución acuosa de amoniaco a una concentración del 0,04%

-0,2ml de hidróxido amónico (NH4OH) al 20%
-99,8ml de agua destilada

• Suero fisiológico (solución salina al 0,9%)

https://www.google.es/search?q=hematie+fragilidad&biw=1280&bih=705&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=OzD8VOq

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TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

• 3 Tubos: uno con las siglas SF (suero fisiológico), otro SC (sangre control) y SP (sangre problema)
• Rellenar con:

Tubo SF: 1,8 ml de suero fisiológico + 0,2 ml de sangre problema

Tubo SC: 1,8 ml de solución sacarosa + 0,2 ml de sangre control

Tubo SP: 1,8 ml de solución sacarosa + 0,2 ml de sangre problema

• Agitar los tubos
• Dejarlos a temperatura ambiente durante 30minutos
• Centrifugar a 2000 rpm/5min

OBSERVACIÓN

• Su lectua puede ser visual o espectrofotométrica
• NO HEMÓLISIS: se observa un botón sedimentario rojizo y un líquido sobrenadante incoloro y transparente
• SÍ HEMÓLISIS: cuando se advierte la presencia de un líquido rojizo y transparente, en los tubos SF Y SC no tiene que haber hemólisis, ya que estos tubos funcionan como controles negativos
• Lectura espectrofotométrica:

Tubo TB (tubo blanco): 5ml de solución de amoniaco + 0,3ml de suero fisiológico

Tubo TPr (tubo problema): 5ml de solución de amoniaco + 0,3 ml de sobrenadante del tubo SP

Tubo TPa (tubo patrón): 5ml de solución de amoniaco + 0,3 ml líquido resuspendido del tubo SF

• Se utiliza el líquido del tubo blanco para poner el aparato a 0 de A, y el líquido del tubo patrón se emplea para determinar la A que corresponde a un 100% de hemólisis
• Fórmula:

% de hemólisis= A/Am x 100



 

(A: absorbancia del líquido presente en el tubo problema, Am: absorbancia del líquido contenido en el tubo patrón )

• La prueba de la sacarosa suele ser positiva en la HPM, en esta enfermedad su grado de positividad es de 10-80% de hemólisis
• Es negativa en la diseritropoyesis congénita tipo II (HEMPAS)

HOJA DE TRABAJO

 

A) ¿A qué concentración se prepara la solución de sacarosa?

9,24%

 

B) ¿Cómo se llama la sacarosa?

Azúcar común

 

C) ¿Cómo se prepara el tubo blanco?

5ml de solución de amoniaco + 0,3 ml de suero fisiológico

 

D) ¿Qué porcentaje de hemólisis suele producirse, en la sangre de la HPN?

10-80% de hemólisis

 

RESULTADOS OBTENIDOS

 

TB= 0,155

TPr= 0,115

TPa= 0,121

 

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